Введение
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Часть 1.1. Свойства водных эмульсий фосфолипидов в отсутствие и присутствии различных биологически активных соединений 10
1.11. Свойства индивидуальных фосфолипидов и их смесей в водной фазе 10
1.1.2.Структурная организация и лилидный состав биомембран 26
1.1.3.Современные представления о механизмах взаимодействия мембран и белков разных типов (мембранные, периферические белки, немембранные водорастворимые белки) 43
1.1.4. Интерфазный катализ 54
Часть 1.2. Липосомальные формы противотуберкулезных препаратов для лечения туберкулеза легких 57
1.2/.. Строение и свойства М. tuberculosis микобактерии и
начальные этапы взаимодействия с макрофагами 58
1.2.2. Схема терапии туберкулеза легких и описание свойств
препаратов - производных рифамицина (рифампицина и
рифабутина) 74
1.2.3. Липосомы с противотуберкулезными препаратами для
лечения заболеваний легких
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
ГЛАВА 2. Свойства модельных и биологических мембран, модифицированных фосфолипазами разных типов:
Часть 2.1. Оптимизация условий гидролиза фосфолипидов в составе агрегатов различного строения фосфолипазами 102.
2.1.1. Гидролиз ФХ в присутствии дезоксихолата под действием фосфолипазы С 102
Часть 2. Белок-липидные комплексы 174
4.2.1. Оптимизация условий их получения и анализ состава 174
4.2.2. Характеристики полученных комлексов 179
4.2.3. Структурная организация фосфолипидов в белок-липидных комплексах 187
4.2.4. Взаимодействие немембранных водорастворимых белков с фосфолипидами цвиттер-ионами 190
4.2.5. Активность белков в составе белок-липидных комплексов 207
Часть 4.3.Комплексы фосфолипидов с бактериоцинами и их антимикробная активность 220
ГЛАВА 5 Взаимодействие антибиотиков рифамицинового ряда с модельными
мембранами ; получение липосомальных форм рифампицина и рифабутина.
Часть 5.1. Физико-химические характеристики рифампицина и рифабутина в зависимости отрН среды (растворимость, рКа) 226
5.1.1.Растворимость антибиотиков в зависимости от рН среды 228
5.1.2. Определение рКа антибиотиков 229
Часть 5.2. Связывание антибиотиков рифамицинового ряда с модельными мембранами 242
5.2.1 Методы получения липосомальной формы рифампицина и рифабутина 242
5.2.2.Оптимизация условий включения ПТП в липосомы 244
5.2.3..Влияние ионной силы на включение антибиотиков в пипосомы 253
5.2.4. Влияние природы буфера с различной ионной силой на включение антибиотиков в липосомы при рН=6,0 256
5.2.5. Влияние рН среды на включение антибиотиков в липосомы из ФХ 258
Часть 5.3. Исследование механизма взаимодействия антибиотиков с модельными мембранами с помощью коэффициента распределения октанол/вода и липосомы/вода 259
5.3.1.Определение коэффициента распределения антибиотиков методом разделения фаз. 263
5.3.2., Определение К<1 антибиотиков в системе 4
Часть 4.2. Белок-липидные комплексы 174
4.2.1. Оптимизация условий их получения и анализ состава 174
4.2.2. Характеристики полученных комлексов 179
4.2.3. Структурная организация фосфолипидов в белок-липидных комплексах 187
4.2.4. Взаимодействие немембранных водорастворимых белков с фосфолипидами цвиттер-ионами 190
4.2.5. Активность белков в составе белок-липидных комплексов 207
Часть 4.3.Комплексы фосфолипидов с бактериоцинами и их антимикробная активность 220
ГЛАВА 5 Взаимодействие антибиотиков рифамицинового ряда с модельными мембранами ; получение липосомальных форм рифампицина и рифабутина.
Часть 5.1. Физико-химические характеристики рифампицина и рифабутина в зависимости отрН среды (растворимость, рКа) 226
5.1.1.Растворимость антибиотиков в зависимости от рН среды 228
5.1.2. Определение рКа антибиотиков 229
Часть 5.2. Связывание антибиотиков рифамицинового ряда с модельными мембранами 242
5.2.1 Методы получения липосомальной формы рифампицина и рифабутина 242
5.2.2.Оптимизация условий включения ПТП в липосомы 244
5.2.3..Влияние ионной силы на включение антибиотиков в пипосомы 253
5.2.4. Влияние природы буфера с различной ионной силой на включение антибиотиков в липосомы при рН=6,0 256
5.2.5. Влияние рН среды на включение антибиотиков в липосомы из ФХ 258
Часть 5.3. Исследование механизма взаимодействия антибиотиков с модельными мембранами с помощью коэффициента распределения октанол/вода и липосомы/вода 259
5.3.1.Определение коэффициента распределения антибиотиков методом разделения фаз. 263
5.3.2., Определение К<1 антибиотиков в системе 4
5.3.2.. Определение Kd антибиотиков в системе липосомы/ вода методом флуоресценции. 267
5.3.3..Коэффициент распределения Kd антибиотиков в системе октанол/вода. 278
Часть 5..4. Стабильность рифампицина в водной фазе и в составе липосом. Антимикробная активность препаратов 284
5.4.1. Получение стандартов-индивидуальных продуктов деструкции и окисления рифампицина 284
5.4.2. Анализ продуктов деструкции и окисления водного и липосомального препаратов РФ при хранении при 25 С 288
5.4.3. Продукты деструкции рифампицина в составе липосомальной формы при хранении при 4С. 290
5.4.4. Лиофилизированный липосомальный препарат 292
5.4.5. Бактериостатическая активность липосомальной формы рифампицина при различных сроках хранения 295
ГЛАВА 6. Эффективность действия «ПУСТЫХ» ЛИПОСОМ И липосомальных форм противотуберкулезных препаратов в отношении микобактерий 297
Часть 6.1. Взаимодействие «пустых» липосом с М. tuberculosis и М. avium в
среде инкубации и инфицированных макрофагах мышей 298
Часть 6.2. Взаимодействие «пустых» липосом с М. smegmatis 309
Часть 6.3. Эффективность действия рифампицина в растворе и в составе
липосом в отношении М. tuberculosis H37Rv и М. smegmatis 319
Часть 6.4. Исследование эффективности действия рифампицина в
растворе и в составе липосом на модели экспериментального туберкулеза у
мышей 320
ГЛАВА 7. Материалы и методы исследований 334
Часть 7.1. Используемые в работе реактивы 334
Часть 7.2. Методы исследования 337
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 345
ВЫВОДЫ 346
ГЛАВА 8. Список литературы 348
