Введение
2. Обзор литературы 14
2.1. Воздействие факторов космического полета (КП) на организм человека 14
2.2. Новые методы исследования: OMICs 15
2.2.1.Преимущества и недостатки масс-спектрометрического анализа 17
2.2.2. Выбор объекта масс-спектрометрического анализа при исследовании влияний факторов космического полета на функционирование эндотелия 18
2.3. Влияние факторов КП на функциональное состояние сердечно-сосудистой системы 21
2.4. Белки сердечно-сосудистой системы и эндотелия в условиях модельных экспериментов 2.4.1. Влияние АНОГ на сердечно-сосудистую систему 28
2.4.2. Влияние длительной изоляции на белки сердечно-сосудистой системы и эндотелия 35
2.5. Влияние факторов космического полета на эндотелиальные клетки in vitro 41
3. Материалы и методы 52
3. 1. Материалы 52
3.2. Объекты исследования 53
3.2.1. Условия сбора образцов в 105-суточной изоляции в гермообъеме 53
3.2.2. Условия сбора образцов мочи и крови космонавтов, совершивших длительные космические полеты 54
3.2.3. Культивируемые эндотелиальные клетки 54
3. 3. Методы исследования 55
3.3.1. Получение образцов мочи 55
3.3.2. Получение образцов плазмы крови 56
3.3.3. Получение образцов клеток, микрочастиц и среды культивирования эндотелиальных клеток 56
3.3.4. Подготовка экспериментальных образцов к хромато-масс-спектрометрическому анализу 56
3.3.5. Этапы пробоподготовки к хромато-масс-спектрометрическому анализу 57
3.3.6. Хромато-масс-спектрометрический анализ 59
3.3.7. Качественный и полуколичественный анализ содержания белков в смеси 60
3.3.8. Количественный анализ содержания белков в смеси 61
3.3.9. Биоинформационные методы 62
3.3.10. Статистический анализ 62
3.3.11. Определение концентрации белка по Бредфорду 63
3.3.12. Выбор метода очистки культуральной жидкости эндотелиальных клеток от мажорных белков фетальной телячьей сыворотки 63
3.3.13. Очистка образцов от альбумина 64
3.3.14. Вертикальный электрофорез в полиакриламидном геле c додецил сульфатом натрия 65
4. Результаты и обсуждение 67
4.1. Характеристика протеомного профиля мочи человека и определение эндотелий ассоциированных белков в модельных условиях и после космического полета 67
4.1.1. Протеомный анализ мочи человека и поиск белков, связанных с функционированием эндотелия, в условиях длительной изоляции (105 суток) 67
4.1.2. Протеомный анализ мочи человека и поиск белков, связанных с функционированием эндотелия, после длительного космического полета 72
4.2. Анализ влияния длительного космического полета на профиль белков плазмы крови космонавтов 79
4.3. Исследование секретома культивируемых эндотелиальных клеток человека (HUVEC) при моделировании эффектов микрогравитации (3D-клиностатирование) 96
4.4. Изучение протеомного профиля культивируемых эндотелиальных клеток человека при моделировании эффектов микрогравитации с помощью 3D-клиностатирования 109
4.5. Изучение протеомного профиля микрочастиц, выделенных эндотелиальными клетками (HUVEC), при моделировании эффектов микрогравитации 122
5. Заключение 138
6. Выводы 143
7. Список литературы 144
