Введение
2. Обзор литературы 7
2.1. Бронхиальная астма 7
2.1.1. Клеточный ответ при астме 8
2.1.2. Гуморальный иммунный ответ при астме 17
2.2. Белки теплового шока 24
2.2.1. Семейства белков теплового шока 25
2.2.2. Семейство БТШ70 27
2.2.3. БТШ70 и иммунитет 34
2.2.4. БТШ70 в аллергии и астме 34
2.2.5. БТШ70 при воспалении дыхательных путей 35
2.2.6. БТШ70 в регуляции активности нейтрофилов 2.3. Активные формы кислорода 36
2.4. NADPH-оксидаза 2.4.1. Свойства и функции компонентов NADPH-оксидазы 39
2.4.2. Ингибиторы NADPH-оксидазы 42
2.4.3. NADPH-оксидаза и цитоскелет 42
2.4.4. Взаимодействие БТШ70 и NADPH-оксидазы 43
3. Материалы и методы 43
3.1. Буферные растворы 43
3.2. Животные и клеточные модели
3.2.1. Животные 44
3.2.2. Индукция воспаления дыхательных путей с помощью овальбумина... 44
3.2.3. Определение общего количества и популяционного состава клеток бронхоальвеолярного лаважа (бронхоальвеолярного смыва) 45
3.2.4. Определение уровня цитокинов в бронхоальвеолярных лаважах 46
3.2.5. Определение уровня иммуноглобулинов 47
3.2.6. Выделение клеток и приготовление клеточных суспензий 47
3.2.7. Регистрация уровня внеклеточной РНК 48
3.2.8. Регистрация активных форм кислорода 49
3.2.9. Индукция «окислительного взрыва» 50
3.2.10.Ингибиторы продукции АФК 50
3.3. Выделение белка БТШ70 из внутренних органов мышей 50
3.3.1. Получение гомогенатов печени и почек мышей 51
3.3.2. Выделение БТШ70 с помощью аффинной хроматографии на АТФ-агарозе 51
3.3.3. Диализ в бикарбонатном буфере 52
3.3.4. Выделение БТШ70 с помощью аффинной хроматографии наМ-агарозе 52
3.3.5. Очистка БТШ70 от контаминации бактериальных липополисахаридов 52
3.3.6. Определение концентрации белка 53
3.3.7. Электрофорез вПААГ 53
3.3.8. Вестерн-блот анализ 53
3.3.9. Определение содержания примеси LPS 54
3.4. Статистическая обработка результатов 54
4. Результаты исследований 55
4.1. Особенности получения и очистки белка БТШ70 55
4.2. Характеристика острой и эффекторной фазы аллергического воспаления дыхательных путей 56
4.3. Общее количество и популяционный состав клеток бронхоальвеолярных лаважей 57
4.4. Изменение уровня цитокинов в дыхательных путях 58
4.5. Продукция аллерген-специфических антител 59 4.6. Снижение уровня секреции проаллергических цитокинов под действием БТШ70 62
4.7. Влияние БТШ70 на системную и локальную продукцию аллерген-специфических иммуноглобулинов 63
4.8. Подавление роста общего количества и изменение популяционного состава клеток БАЛ мышей с аллергическим воспалением дыхательных путей после введения БТШ70 64
4.9. Оценка влияния БТШ70 на количество нейтрофилов в костном мозге мышей с индуцированным аллергическим воспалением 66
4.10. Влияние БТШ70 на уровень внеклеточной РНК в культуре активированных нейтрофилов 67
4.11. Оптимизация клеточной модели для исследования антиоксидантной активности БТШ70 69
4.12. Исследование влияния экзогенного БТШ70 на продукцию АФК in vitro. 11
4.13. Изменение продукции активных форм кислорода клетками костного мозга мышей на различных стадиях аллергического воспаления дыхательных путей.
5. Обсуждение полученных результатов 96
6. Выводы 102
7. Список используемых сокращений 103
8. Список литературы
