Введение
ГЛАВА 1. Живая гриппозная вакцина (ЖГВ) 17
1.1. Основные этапы разработки живой аттенуированной вакцины против гриппа 18
1.2. Реассортантные ЖГВ и доноры аттенуации для их подготовки 20
1.3. Изучение молекулярных основ аттенуации вирусов гриппа 24
1.4. Вакцинопрофилактика гриппа с помощью реассортантной ЖГВ на основе холодоадаптированных донорских штаммов 32
ГЛАВА 2. Характеристика предпандемической ситуации 36
2.1. Кандидаты в пандемические штаммы 36
2.2. Особенности клинической картины при заражении людей высокопатогенными вирусами гриппа 41
2.3. Антигенная изменчивость вирусов A(H5N1) и способность к трансмиссии от человека к человеку 43
2.4. Роль отдельных генов в проявлении патогенности и расширении круга чувствительных хозяев вирусов гриппа А 45
2.5. Маркеры высокой патогенности вирусов птичьего гриппа на различных животных моделях 55
2.6. Оценка развития современной предпандемической ситуации и возможные меры и средства профилактики 61
ГЛАВА 3. Разработка вакциіі против пандемически опасных вирусов гриппа 68
3.1. Разработка инактивированных вакцин против вирусов гриппа, обладающих пандемическим потенциалом 68
3.2. Разработка ЖГВ при подготовке к пандемии 80
3.3. Основные требования, предъявляемые к гриппозным вакцинам при подготовке к пандемии и пути усовершенствования вакцинных препаратов 83
Заключение 99
Собственные исследования
Глава 4. Материалы и методы 102
4.1. Вирусологические методы 102
4.2. Методы работы с хорьками 106
4.3. Методы работы с мышами 107
4.4. Клиническое изучение безвредности и эффективности ЖГВ, содержащей реассортантные вакцинные штаммы на основе холодоадаптированных доноров аттенуации 110
4.5. Статистическая обработка данных 113
ГЛАВА 5. Изучение молекулярных основ аттенуации холодоадаптированных штаммов вирусов гриппа А И В 114
5.1. Изучение биологических свойств штамма подтипа A(H2N2) -
А/Москва/21/17/65 114
5.2. Молекулярно-генетический анализ холодоадаптированного штамма A/MocKBa/21/17/65(H2N2) 122
5.3. Сравнительный анализ различных холодоадаптированных вирусов подтипа A(H2N2) 130
5.4. Изучение свойств полигенных реассортантов на основе штамма A/MocKBa/21/17/65(H2N2) 133
5.5. Характеристика донора аттенуации для компонента В тривалентной живой гриппозной вакцины - В/СССР/60/69 137
5.5.1. Молекулярно-генетический анализ и рестриктазное картирование
донора аттенуации В/СССР/60/69 137
5.5.2. Изучение свойств холодоадаптации и аттенуации для
хорьков 146
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 149
ГЛАВА 6. Подготовка реассортантов птичьих вирусов на основе донора аттенуации а/ленинград/134/17/57(Н2Ы2) 151
6.1. Характеристика вирусов птичьего гриппа, использованных в качестве источника поверхностных антигенов 151
6.2. Реассортация и определение состава генома реассортантов 152
6.3. Ростовые характеристики реассортантов птичьих вирусов на основе штамма А/Ленинград/134/17/57(Н2К2) при различных температурах инкубации в куриных эмбрионах 154
6.4. Оценка безвредности холодоадаптированных реассортантов, содержащих гены вирусов гриппа птиц, при введении курам 156
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 159
ГЛАВА 7. Результаты доклинического изучения кандидата в вакцинные штаммы ЖГВ А17/УТКА/ПОТСДАМ/86/92(Н5Ш) 160
7.1. Молекулярно-генетический анализ гемагглютинина и антигенные свойства реассортантного штамма А17/Утка/Потсдам/86/92(Н5№) 160
7.2. Изучение генетической стабильности реассортантного штамма A(H5N2) после пассажей в носовых ходах хорька 166
7.3. Безвредность кандидата в вакцинные штаммы подтипа A(H5N2) при интраназальном введении мышам 167
7.4. Сравнительное изучение иммуногенности при введении ЖГВ и ИГВ подтипа A(H5N2) белым мышам 169
7.5. Эффективность ЖГВ и ИГВ подтипа A(H5N2) против инфекции вирусами A(H5N1), выделенными в 1997 и 2003 гг. в Гонконге 174
7.6. Оценка эффективности реассортанта А17/Утка/Потсдам/86/92
(H5N2) против реинфекции вирусом A(H5N1), выделенным в 2004 году о время вспышки во Вьетнаме 176
7.7. Защита против реинфекции антигенным вариантом вируса A(H5N1), выделенным в 2005 году на территории Российской Федерации 180
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 188
ГЛАВА 8. Результаты доклинического изучения кандидата в вакцинные штаммы ЖГВ A(H7N3) 189
8.1. Молекулярно-генетический анализ гемагглютинина 189
8.2. Антигенная специфичность 193
8.3. Показатели репродукции в РКЭ 193
8.4. Взучение прививочныех свойств кандидата в вакцинные штаммы A(H7N3) на модели белых мышей BALB/c 197
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 200
ГЛАВА 9. Клиническое изучение безвредности и иммуногенности живой гриппозной вакцины A(H5N2) -Штамм А/17/Утка/Потсдам/86/92(Н5Ы2) 201
9.1. Организация исследования 201
9.2. Результаты 206
9.2.1. Безвредность и реактогенность 206
9.2.2. Выделение и анализ реизолятов вакцинного штамма от привитых 210
9.2.3. Иммуногенность 212
Заключение 223
Глава 10. Стратегия и тактика вакцинопрофилактики с использованием жгв в интерпандемический период и при подготовке к пандемии 224
10.1. Вакцинопрофилактика с использованием ЖГВ среди лиц высокого риска 224
10.2. Вакцинация детей дошкольного возраста ЖГВ для взрослых в качестве единого препарата для взрослых и детей 239
10.3. Экспериментальное изучение прививочных свойств реассортантного штамма А/17/Утка/Потсдам/86/92(Н5Ы2) в составе поливалентной вакцины, включающей реассортантные штаммы современных эпидемических вирусов A(H1N1), A(H3N2) и В 256
10.4. Изучение на на экспериментальной модели прививочных свойств ЖГВ подтипа A(H5N2) при сочетанной вакцинации с ИГВ 263
Заключение 268
Глава 11. Обсуждение полученных результатов 270
Выводы 293
Список литературы
