Введение
ГЛАВА 1. Низкомолекулярные аминотиолы плазмы крови и их роль в патогенезе ишемического повреждения мозга
1.1 Биохимия гомоцистеина и других аминотиолов
1.1.1 Содержание и фракционный состав гомоцистеина и других аминотиолов в плазме крови 10
1.1.2 Биосинтез и пути метаболизма аминотиолов .12
1.1.3 Химические свойства SH-групп тиолов .16
1.1.4 Аминотиолы и антиоксидантная защита организма 17
1.2 Механизмы повреждающего действия гомоцистеина
1.2.1 Внутриклеточные мишени повреждающего действия гомоцистеина 19
1.2.2 Гомоцистеинилирование белков плазмы крови
1.3 Нейротоксичность гомоцистеина .26
1.4 Глутатионилирование белков как механизм цитопротекции при ишемическом повреждении головного мозга 29
ГЛАВА 2. Аналитические платформы и технологии мониторинга уровня гомоцистеина и других аминотиолов в плазме крови
2.1 Общие замечания 33
2.2 Высокоэффективная жидкостная хроматография
2.2.1 ВЭЖХ-Фл 34
2.2.2 ВЭЖХ-УФ 36
2.2.3 ВЭЖХ-МС 39
2.2.4 ВЭЖХ c детектором сцинтилляции 40
2.2.5 Электрохимический детектор 40
2.3 Капиллярный электрофорез
2.3.1 КЭ-УФ .41
2.3.2 КЭ-ЛИФ 44 Раздел II. собственные исследования
ГЛАВА 3. Общая характеристика экспериментального материала и дизайн исследования
3.1 Реактивы 46
3.2 Материалы и Оборудование
3.2.1 ВЭЖХ 46
3.2.2 Масс-спектрометрия 47
3.2.3 Капиллярный электрофорез
3.3 Объекты исследования 47
3.4 Экспериментальные модели на животных
3.4.1 Моделирование фокальной ишемии головного мозга 47
3.4.2 Моделирование глобальной ишемии головного мозга 48
3.4.3 Моделирование гипергомоцистеинемии у крыс 48
3.4.4 Регистрация мозгового кровотока 49
3.5 Методы определения аминотиолов
3.5.1 Определение фракций Гцис в плазме крови по его NEM-производному с использованием ВЭЖХ-МС... 49
3.5.2 Определение фракций аминотиолов в плазме крови по их ТНБ-производным методом ВЭЖХ-УФ 51
3.5.3 Определение фракций аминотиолов в плазме крови по их mBrB-производным методом ВЭЖХ-Фл 52
3.5.4 Прямое определение общего гомоцистеина в плазме крови с использованием КЭ-МС.. 53
3.5.5 Метод КЭ-УФ для определения связанных аминотилов по их тиокарбонильным производным 55
ГЛАВА 4. Результаты и обсуждение
4.1 Прямое определение общего гомоцистеина плазмы крови методом капиллярного электрофореза и масс-спектрометрии 56
4.2 Определение связанных аминотиолов плазмы методом капиллярного электрофореза по их циклическим S,N-тиокарбонильным производным 59
4.3 Анализ плазменных фракций гомоцистеина по его N-этилсукцинимидному производному с использованием хроматомасс-спектрометрии 64
4.4 Определение общих и восстановленных аминотиолов плазмы крови человека методом жидкостной хроматографии по их тионитробензойным производным. 69
4.5 Сравнение хроматографических методик определения гомоцистеина, цистеина и глутатиона .74
4.6 Апробация метода жидкостной хроматографии для определения аминотиолов по их тионитробензойным производным
на экспериментальной модели гипергомоцистеинемии 82
4.7 Редокс-статус аминотиолов плазмы крови крыс при локальной
и глобальной ишемии головного мозга .87
Выводы 97
Заключение 99
Список литературы 100
Список сокращений и обозначений..
