Введение
Глава I Обзор литературы 12
1.1 Микрочипы в диагностике и научных исследованиях 12
1.1.1 Нанотехнологии па основе биологических микрочипов 12
1.1.2 Перспективные методы анализа генетического полиморфизма 15
1.1.3 Биочипы для изучения генетической предрасположенности 21
1.2 Изучение генетического полиморфизма репин-ангиотензиновой и кинин-брадикшшновой системы 23
1.2.1 Генетический полиморфизм и сердечно-сосудистая система 23
1.2.1.1 Определение генетического полиморфизма. Его значение в современной медицинской генетике 23
1.2.1.2 Сердечно-сосудистые заболевания 24
1.2.1.3 Гены «предрасположенности» к сердечно-сосудистым заболеваниям 24
1.2.2 Артериальная гипертензия 31
1.2.2.1 Этиология и патогенез 31
1.2.2.2 Формирование представлений о генетической природе артериальной гипертензии 34
1.2.3 Ренин-ангиотешиновая и кинин-брадикипиновая системы.- 38
1.2.4 Гены «предрасположенности» к артериальной гипертензии 40
1.2.4.1 Репин 40
1.2.4.2 Ангиотензиноген 40
1.2.4.3 Ангиотепзинпревращающий фермент 41
1.2.4.4 Рецептор 1 к ангиотензину II 43
1.2.4.5 Рецептор 2 к ангиотензину II 44
1.2.4.6 Рецептор 2 кбрадикинину 44
1.2,5 Комплексное изучение ассоциации полиморфизма генов ренин-ангиотензиповой системы с предрасположенностью к артериальной ги-
пертензии 45
Глава II 2 Материалы и методы 48
2.1 Характеристика исследуемых групп 48
2.2 Синтез олигонуклеотидов и изготовление микрочипов 50
2.3 Экстракция геномной ДНК из лимфоцитов периферической крови и клеток буккального эпителия 54
2.4 Проведение полимеразной цепной реакции 55
2.4.1 Амплификация фрагментов ДНК для анализа методом ПААГ 56
2.4.2 Амплификация фрагментов ДНК для анализа методом гибридизации на олигонуклеотидном биочипе 57
2.5 Анализ ПЦР продуктов методом ПААГ 62
2.6 Визуализация ПЦР продуктов в агарозном геле 63
2.7 Гибридизация меченого продукта на микрочипе 63
2.8 Регистрация изображения и его обработка 64
2.8.1 Анализ "фармакогенетического биочипа" 65
2.8.2 Анализ "кардиочипа" 66
2.9 Статистическая обработка данных 67
Глава III 3 Результаты и обсуждение 68
3.1 Разработка алгоритма создания биочип-тест-систем для анализа генетического полиморфизма человека , 68
3.1.1 Создание "фармакогенетического биочипа" 68
3.1.1.1 Выбор генов и полиморфных вариантов 68
3.1.1.2 Выбор нуклеотидных последовательностей и длин ПЦР продуктов, последовательностей концевых праимеров и последовательностей иммобилизованных олигонуклеотидных зондов..., 69
3.1.1.3 Особенности проведения мультиплексной ПЦР и гибридизации... 74
3.1.1.4 Конструирование биочипа. Блочный подход 75
3.1.1.5 Блочная организация микрочипа 76
3.1.1.6 Анализ контрольных и диагностических образцов. Специфичность и чувствительность метода 82
3.1.1.7 Алгоритм создания биочипов для анализа генетического полиморфизма 84
3.2 Создание "кардиочипа" 86
3.2,1 Выбор генов и полиморфных вариантов 86
3.2,2. Схема и структура микрочипа 87
3.2.3 Анализ контрольных и диагностических образцов 89
3.3 Сравнение метода гибридизации на биочипах с классическими методами анализа генетического полиморфизма 89
3.4 Применение биочипов в медицине и биологии , 91
3,5, Анализ полиморфизма генов реиин-ангиотензиновой и кинин-брадикшшновой систем у больных артериальной гипертензией и в контроле 92
3.5.1 Сравнительный анализ частот аллелей и генотипов у детей, больных артериальной гипертонией, и в контроле 92
3.5.1.1 Анализ соответствия распределений закону Харди-Вайнберга 92
3.5Л.2 Сравнительный анализ частот генотипов и аллелей изученных генов 93
3.5.2 Анализ ассоциации показателей ИМТ, САД, ДАД и генотипов изученных генов у детей, больных артериальной гипертонией 108
3.5.3 Корреляционный анализ взаимосвязи генотипов изученных генов, ИМТ, САД и ДАД у детей, больных артериальной гипертонией, и в контроле , 111
3.5.4 Комплексный анализ ренин-ангиотензиновой и кинин-брадикиншговой систем у детей, больных артериальной гипертонией, и в контроле 115
Заключение 121
Выводы 124
Список литературы
