Введение
Глава 1.Обзор литературы 15
1.1. Хитозан в качестве средства доставки генов 15
1.1.1. Носители на основе хитозана в генной терапии 19
1.1.1.1. Комплексы хитозан-ДНК 20
1.1.1.2. Наночастицы хитозана 21
1.1.1.3 Наночастицы на основе хитозана/альгината 23
1.1.2. Свойства хитозана в качестве носителя для доставки генов 23
1.1.2.1. Основные свойства хитозана 23
1.1.2.2. Образование наночастиц с ДНК/миРНК 25
1.1.3. Факторы, связанные с подготовкой хитозана, влияющие на доставку ДНК 26
1.1.3.1. Молекулярная масса хитозана 27
1.1.3.2. Степень дезацетилирования хитозана 29
1.1.3.3. Отношение азота к фосфору N/P 30
1.1.3.4. Солевые формы хитозана 32
1.1.3.5. Концентрация плазмиды 32
1.1.3.6. pH культуральной среды 33
1.1.3.7. Наличие сыворотки 45
1.1.3.8. Влияние добавок 36
1.1.3.9. Стабильность к полианионам 37
1.1.3.10. Хитозан в качестве добавки 37
1.1.3.11. Методы приготовления хитозановых наночастиц 39
1.1.3.12. Влияние пути применения 39
1.2. Система доставки белков на основе хитозана 41
1.2.1. Хитозан (производные) 41
1.2.2. Методы подготовки хитозан-содержащих частиц с белками 44
1.2.2.1. Химические методы сшивки 45
1.2.2.2. Методы ионного сшивания 46
1.2.2.3. Методы с использованием сушки 50
1.3. Хитозан и его дериваты в орган-специфичной доставке лекарств 50
1.3.1. Адресная доставка лекарств в толстый кишечник 50
1.3.2. Адресная доставка в печень 53
1.3.3. Адресная доставка в почки и легкие 55
1.4. Хитозан и его производные в адресной доставке противоопухолевых лекарств 56
1.4.1. Пассивный таргетинг – эффект повышенной проницаемости и удерживания 57
1.4.1.1. Конъюгаты хитозан-лекарство 58
1.4.1.2. Поперечно-сшитые наночастицы хитозана 59
1.4.1.3. Наночастицы на основе комплекса хитозан – полиэлектролиты 60
1.4.1.4. Наночастицы ПЭГ-хитозан 62
1.4.2. Активное нацелевание — рецептор-опосредованный эндоцитоз 62
1.4.3. Физическое нацеливание 65
1.4.3.1. Соединения на основе хитозана чувствительные к стимулам среды 65
1.4.3.2. Магнитные наночастицы на основе хитозана 67
Экспериментальная часть 68
Глава 2. Материалы и методы исследований 68
2.1. Реактивы и оборудование 68
2.2. Выделение плазмид 73
2.3. Приготовление альгинатных комплексов с инкапсулированным пропранолом 74
2.4. Подготовка наночастиц хитозан, хитозан / альгината и хитозана / альгината-декстран сульфата загруженной пДНК. 76
2.5. Приготовление хитозан/декстран сульфат-пДНК композитных наночастиц. 78
2.6. Клеточные линии 80
2.7. Оценка цитотоксичност наночастиц 80
2.8. Трансфекция In-vitro 82
2.9. Определение эффективности трансфекции 83
2.10. Характеристика хитозан/декстран композитных наночастиц с инкапсулированной ДНК 84
2.10.1. Размер частиц, ИП, зета-потенциал 84
2.10.1.1. Анализ альгинатных частиц, содержащих пропранол 84
2.10.2. Морфология 84
2.10.2.1. Сканирующая электронная микроскопия (СЭМ) альгинатных частиц с пропранолом 85
2.10.3. Электрофорез в агарозном геле 86
2.11. Набухание альгинатных частиц с пропранолом 86
2.12. Определение инкапсулирующей активности 86
2.12.1. Эффективность инкапсуляции Пропранол-HCl 87
2.13. Высвобождение пропранола из альгинатных комплексов in vitro 87
Глава 3. Результаты исследований 88
3.1. рН чувствительная система доставки лекарственных средств, инкапсулированная пропранол гидрохлоридом. 89
3.1.1. Характеристика частиц с инкапсулированным пропранол гидрохлоридом. 90
3.1.1.1. Влияние напряжения, диаметра сопла, концентрации 90 раствора и скорости потока на размер получаемых частиц.
3.1.1.2. Влияние напряжения, диаметра сопла, концентрации раствора и скорости потока на ЭИЛ. 93
3.1.1.3. Влияние усиления матрицы на размер частиц и ЭИЛ 95
3.1.2. Изучение частиц с помощью сканирующей электронной микроскопии(СЭМ) 97
3.1.3. Набухание частиц в СЖР и СКР 98
3.1.4. Высвобождение пропранол гидрохлорида 100
3.2. Биополимерные наночастицы с инкапсулированной плазмидной ДНК 101
3.2.1. Характеризация альгинатных наночастиц, инкапсулированных плазмидной ДНК Characterization of pDNA-loaded nanoparticles based on alginate 103
3.2.1.1.Размер частиц, индекс полидисперсности, зета-потенциал. 103
3.2.1.2. Изучение эффективности инкапсуляции 106
3.2.1.3.Связывание ДНК в наночастицах 106
3.2.2. Изучение наночастиц на основе хитозана с инкапсулированной ДНК. 107
3.2.2.1. Размер частиц, индекс полидисперсности, зета-потенциал наночастиц на основе хитозана 108
3.2.2.1.1. Влияние параметров на размер частиц 108
3.2.2.1.2. Влияние концентраций биополимеров на Индекс Полидисперсности (ИП) 109
3.2.2.1.3. Влияние концентраций биополимеров на зета-потенциал 111
3.2.2.2. Эффективность инкапсуляции 112
3.2.2.3. Изучение морфологии наночастиц 114
3.2.2.4. Связывание ДНК 114
3.2.3. Тестирование цитотоксичности наночастиц 118
3.2.4. Исследование трансфекции in-vitro 120
Глава 4. Выводы
Список литературы
