Введение
2. Обзор литературы 11
2.1. Некробактериоз 11
2.2. Характеристика возбудителя 13
2.2.1. Историческая справка, таксономическое положение 13
2.2.2. Морфология, тинкториальные свойства, метаболическая активность 14
2.2.3. Патологоанатомические изменения 16
2.3. Биохимическая характеристика возбудителя 19
2.3.1. Гемолизин 19
2.3.2. Липополисахаридный эндотоксин (ЛПС) 21 2.3-3. Лейкотоксин 24 2.4- Профилактика и меры борьбы 26
2.4.1. Чувствительность к антибиотикам 27
2.4.2. Специфическая профилактика 28
2.5. Диагностика 28
2.5 1. Иммуноферментный метод для диагностики некробактериоза крупного рогатого скота 29
2.5.2. Реакция иммунофлуоресценции (РИФ) 33
2.5.3 .Гистохимический вариант ИФА 35
2.6. Исследование клеточного иммунитета 37
2.6.1. Роль клеточного и гуморального иммунитета при бактериальных инфекциях 37
2.6.2. ELISPOT-метод 40
2.7. Заключение но обзору литературы 41
3. Материалы и методы 43
4. Собственные исследования. 56
4.1. Выделение и очистка антигена. 56
4.1.1. Электрофорез и иммуноблоттинг 56
4.1.2. Белковый состав антигена 57
4.2, Изучение клеточного и гуморального иммунитета КРС при некробактериозе, 59
4.3, Разработка иммунофлюоресцентной тест системы для определения F.necrophorum в патматериале 63
4,3,1 .Получение коньюгата анти-F.necrophorum IgG - ФИТЦ, 64
4.3,2. Получение коньюгата анти-IgG КРС IgG - ФИТЦ 65
4,3-3.Про верка работы иммунофлюоресцентной тест-системы. 65
4.4.Разработка тест-системы для индикации антител к
F.necrophorum в сыворотке КРС 66
4.4.1. Выделение иммуноглобулина класса G из сыворотки
крови крупного рогатого скота 66
4.4.2. Получение анти-IgG КРС гипериммунной сыворотки 70
4.4.3. Выделение антивидовых иммуноглобулинов (анти-IgG КРС) 71
4.4.4. Мечение антивидовых иммуноглобулинов (анти-IgG КРС) ферментом пероксидазой из хрена 74
4.4-5. Оптимизация условий проведения иммуноферментного
анализа с целью определения антител к F.necrophorum КРС 78
4.4.6- Сравнительная оценка чувствительности ИФА для
детекции антител в сыворотке крови больных животных 81
4.4.7.0предсление диагностического титра антител 82
4,5, Разработка тест-системы для индикации типоспецифичных антигенов F.necrophorum в патматериале и
гнойно-некротических поражениях КРС 84
4.5Л. Получение анти-F.necrophorum IgG 85
4.5-2, Получение коньюгата ainii-F.necrophorum антител с пероксидазой хрена. 87
4.5,3, Оптимизация условий проведения иммуноферментного анализа с целью индикации F.necrophorum 87
4.5.4, Сравнительная оценка конкурентного и «сэндвич» - ИФА для детекции F.necrophorum в патматериале с РТГА- 88
4.6. Разработка тест-системы для гистохимической индикации антигенов F.necrophorum в патматериале 89
5. Обсуждение, 91
6. Выводы 97
7. Практические предложения, 99
8. Список литературы, 100
9. Приложение. 111
