Введение
1. Литературный обзор 9
1.1. Объект исследования и его свойства 9
1.2. Физические свойства амфетамина и его производных 10
1.3. Химические свойства амфетамина. Воздействие на организм человека 11
1.4. Методы исследования наркотических веществ и их метаболитов в биологических жидкостях человека 14
1.4.1. Физико - химические методы 15
1.4.2. Иммунохимические методы 24
1.4.3. Иммуноферментный анализ (ИФА) 30
1.4.3.1. Характеристики качества иммуноферментных тест-систем 33
1.4.3.2. Иммунохимические свойства антител и методы их исследования 36
1.5. Определение антител к наркотическим веществам 42
1.5.1. Антитела к наркотикам, индуцированные у животных 42
1.5.2. Антитела к наркотикам, индуцированные у людей 44
2. Материалы и методы исследований 47
2.1. Материалы исследований 47
2.2. Методы исследований 50
2.2.1. Получение реагентов для иммуноферментного анализа определения амфетамина...50
2.2.2. Синтез конъюгированных антигенов амфетамина с различными белками 51
2.2.2.1. Синтез конъюгированных антигенов амфетамина с овальбумином 51
2.2.2.2. Синтез конъюгированных антигенов амфетамина с бычьим сывороточным альбумином (БСА) 52
2.2.3. Получение антител к амфетамину 53
2.2.4. Определение сыворотки, содержащей антитела к амфетамину, методом иммуноферментного анализа 53
2.2.5. Разработка иммуноферментного анализа определения амфетамина в моче 54
2.2.5.1. Подбор оптимальных условий проведения иммуноферментного анализа с использованием кроличьих антител к амфетамину 54
2.2.5.2. Разработка иммуноферментного анализа определения амфетамина в моче с использованием кроличьих антител 55
2.2.5.3. Подбор оптимальных условий проведения иммуноферментного анализа с использованием овечьих антител к амфетамину 55
2.2.6. Иммуноферментный анализ определения амфетамина в моче 56
2.2.7. Сравнительное определение амфетамина в моче методом ГХМС 56
2.2.8. Разработка иммуноферментного анализа антител к амфетамину в биологических жидкостях человека 57
2.2.8.1. Определение рабочего разведения анализируемой сыворотки крови и концентрации антигена, сорбируемого на планшете 57
2.2.8.2. Определение рабочего разведения анализируемой слюны и концентрации антигена, сорбируемого на планшете 58
2.2.9. ИФА определения антител к амфетамину в биологических жидкостях человека 59
2.2.9.1. ИФА определения антител к амфетамину в сыворотке крови человека 59
2.2.9.2. ИФА определения антител к амфетамину в слюне человека 60
2.2.10. Выделение антител к амфетамину из сыворотки крови человека 60
2.2.10.1.Получение сорбента для аффинной хроматографии антител к амфетамину 60
2.2.10.2. Выделение антител к амфетамину методом аффинной хроматографии 61
2.2.11. Изучение иммунохимических свойств антител к амфетамину. Определение
специфичности и аффинности выделенных на аффинном сорбенте антител к
амфетамину 61
2.2.11.1. Выбор условий проведения ингибиторного ИФА 61
2.2.11.2. Ингибиторный ИФА для оценки специфичности и аффинности антител к амфетамину 62
2.2.11.3. Определение специфичности антител к амфетамину 63
2.2.11.4. Расчёт константы аффинности антител к амфетамину 63
3. Результаты и их обсуждение 64
3.1. Получение реагентов для иммуноферментного анализа определения амфетамина 64
3.1.1. Синтез конъюгированных антигенов амфетамина с различными белками 65
3.1.2. Получение антител к амфетамину 68
3.2. Иммуноферментный анализ определения амфетамина 69
3.2.1. Определение чувствительности разработанного твердофазного ИФА определения амфетамина 71
3.2.2. Определение специфичности разработанного твердофазного ИФА определения амфетамина 72
3.2.3. Определение воспроизводимости результатов разработанного метода ИФА определения амфетамина 73
3.3. Определение амфетамина в биологических жидкостях разработанным твердофазным ИФА и сравнение полученных результатов с другими методами анализа 74
3.4. Иммуноферментный анализ определения антител к амфетамину и определение его диагностической значимости 76
3.4.1. Разработка ИФА выявления антител к амфетамину у больных, употребляющих психостимулирующие препараты амфетаминового ряда 78
3.5. Выделение антител к амфетаминам аффинной хроматографией и исследование их иммунохимических свойств 81
3.5.1. Исследование иммунохимических свойств антител к амфетамину 83
3.5.1.1. Определение константы аффинности (Ка) для антител против амфетамина 83
3.5.1.2. Изучение специфичности аффинно очищенных антител к амфетамину 86
3.6. Иммуноферментный анализ определения антител к наркотическим веществам в биологических жидкостях человека 89
3.6.1. Разработка ИФА выявления иммуноглобулинов человека, связывающих конъюгат амфетамин-белок в сыворотке крови 89
3.6.2. Разработка ИФА выявления иммуноглобулинов человека, связывающих конъюгат амфетамина с белком в слюне 90
3.7. Определение диагностической значимости разработанного ИФА выявления антиамфетаминаых антител в сыворотке крови людей 91
3.8. Определение диагностической значимости разработанного ИФА выявления антиамфетаминовых антител в слюне 93
Выводы 97
Список литературы
