Введение
Глава 1. Проблемы загрязнения окружающей среды хлорограническими пестицидами 9
1.1. Производные полихлорфенолов - предшественники диоксинов 10
1.2. Общая характеристика хлорсодержащих пестицидов: их свойства транспорт и деградация в окружающей среде 13
1.2.1. Пестициды группы хлорфеноксикислот 13
1.2.2. Полихлорфенолы 18
1.2.3. Гербициды класса хлорированных ацетанилидов 22
Глава 2. Методы определения хлорорганических пестицидов в природных объектах. 28
2.1. Физико-химические методы анализа 28
2.1.1. Методы пробоподготовки образцов 31
2.2. Иммунохимические методы анализа пестицидов 32
2.2.1. Основные этапы разработки ИХМ пестицидов 34
2.2.1.1. Дизайн и синтез гаптенов, получение иммуногенов и 35 меченых соединений
2.2.1.2. Получение и характеристика антител 36
2.2.1.3. Оптимизация условий иммуноанализа 38
2.2.2. Твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА) 40
2.2.3. Поляризационный флуоресцентный иммуноанализ (ПФИА) 45 2.2.3.1. ПФИА в системе обращенных мицелл 47
2.2.4. Современные тенденции развития ИХМ 48
2.2.5. Влияние структуры меченого антигена на характеристики ИХМ 51
2.2.6. Методы рассчета констант связывания антиген-антитело 53
Глава 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 61
3.1. Материалы и оборудование 61
3.2. Методы 63
3.2.1. Синтез конъюгатов пестицидов с белками 63
3.2.2. Синтез конъюгатов пестицидов с флуоресцеином 64
3.2.3. Пробоподготовка образцов 67
3.2.4. Методики проведения иммуноанализа 68
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 72
Глава 4. Теоретические закономерности конкурентного ПФИА 72
4.1. Определение констант аффинности антител в ПФИА 76
Глава 5. Влияние структуры иммунореагентов и схем проведения анализа на характеристики ПФИА пестицидов - производных полихлорфенолов. 78
5.1. Тестирование антител, изучение влияния структуры иммуногенов на основные характеристики ПФИА пестицидов. 79
5.2. Определение оптимальных концентраций иммунореагентов. 86
5.3. Влияние структуры меченых антигенов на характеристики ПФИА. 89
5.4. Аналитические характеристики разработанных систем ПФИА: чувствительность, воспроизводимость и селективность определения. 100
5.5. Изучение влияния органических растворителей на характеристики ПФИА пестицидов. 107
5.6. Влияние ионной силы буфера на параметры системы ПФИА. 111
5.7. ПФИА в обращенных мицеллах 113
5.8. Иммуноанализ, основанный на тушении флуоресценции 117
Глава 6. Применение ПФИА для анализа пестицидов в объектах окружающей среды
6.1. Определение пестицидов в образцах природной воды 120
6.2. Разработка методик экстракции хлорфеноксикислот из почвы для их 122 определения методом ПФИА
6.2.1. Методика ультразвуковой экстракции хлорфеноксикислот из 126
почвы
6.2.2. Методика микроволновой экстракции хлорфеноксикислот из
почвы 132
6.3. Корреляция разработанных методик ПФИА с методом жидкостной хроматографии139
Глава 7. Разработка и оптимизация твердофазного иммуноферментного анализа ацетанилидов
7.1. Влияние структуры конъюгата для сорбции на чувствительность анализа, оптимизация концентраций иммунореагенов для проведения ИФА пропанила 140
7.2. Селективность определения пропанила 147
7.3. Влияние структуры конъюгата для сорбции на чувствительность
анализа, оптимизация концентраций иммунореагенов для проведения ИФА ацетохлора 149
7.4. Селективность определения ацетохлора 153
Глава 8. Применение ИФА ацетанилидов для анализа объектов окружающей среды 156
8.1. Определение пестицидов в образцах природной воды 156
8.2. Определение ацетохлора в яблочном соке 157
8.3. Влияние органических растворителей на характеристики ИФА ацетанилидов 159
8.4. Разработка методики экстракции пропанила из зерен риса для его определения методом ИФА 161
8.5. Разработка методики экстракции ацетохлора из кукурузной муки для его определения методом ИФА 164
8.6. Корреляция разработанных методик ИФА с методом ГХ с МС детектированием 186
ВЫВОДЫ ЛИТЕРАТУРА 171
