Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 11
1.1. Система метаболизма (биотрансформации) лекарственных средств 11
1.1.1. История изучения метаболизма лекарственных препаратов 11
1.1.2. Системы и ферменты, участвующие в метаболизме ЛС 13
1.1.2.1. Основные фазы метаболизма. Суперсемейство цитохром Р450 13
1.2. Функциональные особенности и полиморфизм изофермента CYP 2D6 21
1.2.1. -блокаторы как субстрат CYP 2D6 24
1.2.2. Метаболизм антипсихотических ЛС с участием CYP 2D6 25
1.2.3. Влияние заболеваний печени на активность CYP 2D6 26
1.3. Методы определения активности СУР 2D6 (фенотипирование) 27
1.3.1. Количественное определение дебризохина и спартеина 30
1.3.2. Количественное определение трамадола 31
1.3.3. Количественное определение метопролола 31
1.3.4. Количественное определение декстрометорфана 32
1.4. Определение активности CYP 2D6 по отношению пинолин/6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидро--карболин 33
1.4.1. Скрининг эндогенных субстратов CYP 2D6 33
1.4.2. Физические, химические и биохимические свойства пинолина 34
1.4.3. Существующие методики определения пинолина
1.4.3.1. Определение ex vivo 36
1.4.3.2. Определение in vivo 37
1.5. Метод ВЭЖХ-МС/МС 39
Экспериментальная часть (собственные исследования) 42
ГЛАВА 2. Материалы и методы 42
2.1. Оборудование и материалы 42
2.1.1. Материалы 42
2.1.1.1. Стандарты определяемых веществ з
2.1.1.2. Биологическая матрица 42
2.1.1.3. Реактивы 42
2.1.2. Оборудование
2.2. Разработанная методика 43
2.3. Дизайн фармакологической части 44
ГЛАВА 3. Основные результаты и их обсуждение 46
3.1 Разработка методики определения отношения пинолин и 6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидро--карболин 46
3.1.1. Выбор внутреннего стандарта 46
3.1.2. Пробоподготовка
3.1.2.1. Отбор проб. Пробоподготовка 47
3.1.2.2. Пробоподготовка плазмы крови 48
3.1.2.3. Пробоподготовка мочи 50
3.1.2.4. Выводы по результатам пробопоготовки
3.1.3. Хроматографические условия 52
3.1.4. Масс-спектр условия 54
3.2. Валидация методики определения пинолина и
6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидро--карболин 55
3.2.1. Параметры пригодности хроматографической системы 55
3.2.1.1. Селективность 56
3.2.1.2. Линейность зависимости отклика от концентраций определяемых веществ
3.2.1.2.1. Получение данных для построения калибровочного графика 58
3.2.1.2.2. Построение калибровочного графика 58
3.2.1.2.3. Оценка линейности 3.2.1.3. Оценка правильности и прецизионности методики 62
3.2.1.4. Оценка предела количественного определения 63
3.2.1.5. Эффект матрицы 64
3.2.1.6. Стабильность анализируемых веществ 66
3.2.1.6.1. Стабильность стандартного раствора 66
3.2.1.6.2. Стабильность пинолина и его метаболита в составе биологической матрицы при хранении в замороженном состоянии 67
3.2.1.6.3. Стабильность пинолина и его метаболита после пробоподготовки 68
3.2.1.7. Тест на разведение 70
3.3. Зависимость активности изофермента CYP 2D6 и изменения отношения пинолина и 6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидро--карболина
3.3.1. Изучение влияния почечной патологии на активность изофермента CYP 2D6 73
3.3.2. Изменение активности изофермента CYP 2D6 под действием ингибиторов и индукторов 75
Общие выводы 77
Список литературы
