Введение
1. Регуляция экспрессии генома эукариот (обзор литературы) 11
1.1 Клеточное ядро: - уровни регуляции экспрессии генома 12
1.1.1 Регуляция экспрессии генома на эпигенетическом уровне 13
1.1.2. Регуляция экспрессии генома на уровне транскрипции 16
1.1.3.Регуляция экспрессии генома на уровне процессинга пре-мРНК...18
1.1.4. Дифференцированный транспорт мРНК в цитоплазму 21
1.2 Цитоплазма: - уровни регуляции экспрессии генома 22
1.2.1 .Поступление мРНК в цитоплазму 23
1.2.2. Цитоплазматические мРНП 24
1.2.3. Компартментализация мРНК в клетке 26
1.2.4. Регуляция экспрессии генома на уровне трансляции 29
1.2.5. Сигнальные системы клеток растений 34
1.3. Смена наборов синтезирующихся белков в ответ на воздействие экзо и эндогенных факторов 38
1.4. Методические подходы к изучению белоксинтезирующего аппарата эукариотических клеток и стабильности мРНК 53
1.5. Методы оценки стрессоустойчивости растений в селекционной практике 55
2. Материалы и методы 58
2.1. Подготовка растительного материала 58
2.2. Визуализация зоны интенсивного деления клеток проростков 58
2.3. Трансляция in vitro в бесклеточной системе из зародышей пшеницы.59
2.4. Трансляция in vitro в лизате из ретикулоцитов кролика 59
2.5. Выделение полирибосом 60
2.6. Введение in vivo радиоактивной метки в мРНК проростков 61
2.7. Воздействие экзогенных фитогормонов 62
2.8.Выделение суммарной РЫК 62
2.9. Нуклеопротеид - целитная хроматография 63
2.10.Аффинная хроматография на поли(У)-сефарозе 64
2.11. Аффинно-адсорбционная хроматография на поли(У)-сефарозе 64
2.12.Электрофоретический анализ РНК 66
3. Разработка молекулярно-кинетического маркера оценки скорости формирования адаптивного ответа сортов зерновых культур при стрессовом воздействии 61
3.1. Эффект стрессиндуцированного изменения трансляционной активности полирибосом (ТАП) 68
3.2. Эффект распада рибосомной РНК in vitro 84
4. Разработка молекулярно-кинетических маркеров оценки стрессоустоичивости зерновых культур на основе механизма, регулирующего изменение функционального состояния и стабильности мРНК 91
4.1. Эффект дифференциального распада поли(А) мРНК in vitro 92
4.2. Метод аффинно - адсорбционного (АА) фракционирования пула поли(А) мРНК растений 99
4.3. Принципы АА фракционирования полинуклеотидов 105
4.4. Функциональные особенности поли(А) мРНК фракций, получаемых в процессе АА хроматографии 107
4.5. "Скрытая" группа поли(А)мРНК 112
4..6. Модель механизма регуляции белкового синтеза у растений при
стрессе 119
Выводы 126
Рекомендации для практики 128
Список публикаций по теме диссертации 129
Список литературы
