Введение
ГЛАВА 1. Основные биотехнологические методики производства медицинских иммунобиологических препаратов (обзор литературы) .
1.1. Питательные среды для культивирования микроорганизмов 29
1.2. Варианты глубинного культивирования, применяемые при производстве иммунобиологических препаратов 38
1.3. Ферментационное оборудование для культивирования микроорганизмов 43
1.4. Фильтрационные технологии в производстве МИБП 49
1.5. Современные направления усовершенствования противовирусных препаратов на примере средств для постэкспозиционной профилактики бешенства 60
1.6. Иммуноглобулиновые профилактические препараты: классификация и 66 технологии получения
ГЛАВА 2. Материалы и методы 78
2.1. Материалы 79
2.1.1. Штаммы микроорганизмов 79
2.1.2. Питательные среды, используемые в экспериментах . 79
2.1.3. Экспериментальные животные . 80
2.1.4. Реактивы 80
2.1.5. Приборы и оборудование . 84
2.2. Методы 86
2.2.1. Микробиологические методы 86
2.2.2. Биологические методы . 87
2.2.3. Биохимические методы 87
2.2.4. Химические методы 88
2.2.5. Физические методы 88
2.2.6. Физико-химические методы 89
2.2.7. Методы контроля гетерологичного антирабического иммуноглобулина.. 90
2.2.8. Методы математической и статистической обработки материалов 91
Собственные исследования 92
Глава 3. Конструирование питательных сред на основе сухого автолизата пекарских дрожжей для культивирования производственных штаммов холерного вибриона 92
3.1. Конструирование питательных сред на основе дрожжевого автолизата
для культивирования производственных штаммов V. сholerae 95
3.2. Применение питательных сред на основе дрожжевого автолизата для культивирования производственных штаммов V. сholerae . 101
3.3. Экономическая эффективность питательной среды на основе автолизата пекарских дрожжей 106
ГЛАВА 4. Разработка питательных сред для культивирования производственных штаммов v. cholerae на основе гидролизата фибрина 111
4.1. Получение ферментативного гидролизата фибрина . 113
4.2. Конструирование питательных сред на основе ферментативного гидро-лизата фибрина для культивирования штаммов V. сholerae 117
4.3. Сравнительный анализ питательных сред, полученных на основе гидро-лизата фибрина и традиционных сред в условиях глубинного культивирования 122
4.4. Исследования морфометрических показателей холерного вибриона, культивируемого на экспериментальных питательных средах 126
4.5. Экономическая эффективность питательной среды на основе гидролиза-та фибрина 129
ГЛАВА 5. Разработка биореактора для проведения процессов глубинного культивирования производственных штаммов холерного вибриона 133
5.1. Технические и конструкторские решения при создании экспериментального ферментера на базе реактора РЗРЯ-6/0,63 137
5.2. Определение массообменных характеристик аппарата для ферментации... 142
5.3. Исследование процессов культивирования штаммов холерного вибриона – продуцентов протективных антигенов вакцины холерной бивалентной химической 145
5.4. Сравнительный анализ препаратов протективных антигенов V. сholerae и холерной вакцины, полученных с помощью экспериментального и производственного биореакторов 149
5.5. Изучение физико-химических и иммунобиологических свойств холерной вакцины, произведенной по экспериментальной и традиционной технологиям 154
ГЛАВА 6. Оценка риска как основа обеспечения биобезопасности работ с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства. 157
ГЛАВА 7. Применение современных фильтрационных технологий в производстве антирабического иммуноглобулина и разработка принципиальной биотех нологической схемы, обеспечивающей качество препарата при изготовлении коммерческих серий 166
7.1. Разработка биотехнологической системы предварительной осветляющей фильтрация антирабического иммуноглобулина 167
7.2. Разработка технологического модуля для проведения ультрафильтрации антирабического иммуноглобулина 173
7.3. Конструирование фильтрационной системы для эффективного удаления гемпигмента и пирогенов из полуфабриката антирабического иммуноглобулина 178
7.4. Разработка системы стерилизующей фильтрации антирабического иммуноглобулина . 187
ГЛАВА 8. Разработка технологии получения f(ab’)2-фрагментов антирабического иммуноглобулина 196
8.1. Выбор оптимальных параметров ферментативного гидролиза антираби-
ческого иммуноглобулина 199
8.1.1.Определение оптимальной температуры проведения ферментативного 200
гидролиза антирабического иммуноглобулина .
8.1.2. Определение оптимальной рН реакционной смеси при проведении ферментативного гидролиза антирабического иммуноглобулина 201
8.1.3. Определение условий хроматографического фракционирования анти-рабического иммуноглобулина 202
8.1.4. Концентрирование F(ab2’)-фрагментов антирабического иммуноглобулина 204
8.2. Определение физико-химических показателей препарата антирабическо-го иммуноглобулина, полученного на основе F(ab’)2-фрагментов 207
8.3. Исследование иммунобиологических свойств F(ab’)2-фрагментов анти-рабического иммуноглобулина . 210
8.3.1. Определение специфической активности полученных препаратов . 210
8.3.2. Определение токсигенных и анафилактогенных свойств разработанных иммуноглобулинов 216
ГЛАВА 9. Сравнительное изучение тест-системы для диагностики уровня антирабических антител in vitro на основе дот-иммуноанализа
9.1. Подбор мембран для конструирования диагностической тест-системы на основе дот-иммуноанализа . 233
9.2. Детекция уровня вируснейтрализующих антител в коммерческом анти-рабическом иммуноглобулине и гипериммунных сыворотках в дот-иммуноанализе с использованием разработанного диагностикума . 235
9.3. Определение специфичности тест-систем на основе дот-иммуноанализа для детекции антирабических антител 240
9.4. Изучение стабильности диагностикума в процессе хранения 241
9.5. Экономическая эффективность применения тест-системы на основе дот-иммуноанализа в процессе производства гетерологичного антирабического иммуноглобулина 243 заключение . 246
Выводы 257
Список использованной литературы
