Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы . 14
1.1. Гибридомная технология получения МКА . 14
1.2. Серологические методы исследования в лабораторной диагностике холеры . 29
ГЛАВА 2. Материалы и методы 40
2.1. Лабораторные животные . 40
2.2. Бактериальные штаммы . 40
2.3. Клеточные линии позвоночных 40
2.4. Питательные среды и реактивы 41
2.5. Гибридизация клеток 42
2.6. Клонирование гибридом . 44
2.7. Культивирование гибридом in vitro и in vivo 45
2.8. Криоконсервирование гибридом 46
2.9. Подъем из жидкого азота гибридом . 46
2.10. Очистка специфических иммуноглобулинов 46
2.11. Маркировка иммуноглобулинов ФИТЦ 47
2.12. Метод иммунофлуоресценции . 47
2.13. Иммуноферментные методы . 49
2.14. Иммуноблоттинг 50
2.15. Иммунодиффузия в геле по Оухтерлони . 50
2.16. Реакция агглютинации 51 2.17 Методы статистической обработки результатов CLASS ГЛАВА 3. Гибридомы-продуценты мка к антигенам v. cholerae o1 и o139 53 CLASS
3.1. Подъем из азота и оптимизация условий культивирования гибридом-продуцентов МКА, направленных к поверхностным эпитопам V. cholerae О139 53
3.2. Получение и выведение в массовую культуру гибридом, продуцирующих видоспецифические МКА О1 56
3.3. Оценка продукции специфических иммуноглобулинов гибридомами в условиях in vitro . 59
3.4. Получение и накопление в препаративных количествах МКА в виде АЖ 62
3.5. Выделение и очистка специфических иммуноглобулинов различными методами . 65
ГЛАВА 4. Характеристика мка, направленных к видоспецифическим эпитопам v. cholerae O1 и O139 67
4.1. Определение специфичности и активности МКА из АЖ и КЖ в различных серологических реакциях . 67
4.2. Определение класса специфических иммуноглобулинов 72
4.3. Оценка сохранности О-антигенных детерминант холерных вибрионов при различных способах инактивации . 73
4.4. Эпитопная направленность МКА О1 и О139 77
ГЛАВА 5. Иммунофлуоресцентные диагностикумы на основе мка для идентификации и дифференциации холерных вибрионов о1 и о139 серогрупп 79
5.1. Оптимизация условий получения видоспецифических флуоресцирующих моноклональных препаратов для идентификации V. cholerae O1 и O139 . 79
5.2. Наработка экспериментальных серий флуоресцирующих препаратов для испытания на широком наборе штаммов гомологичных и гетерологичных микроорганизмов и подготовка нормативно-технических документов 82
5.3. Лиофилизация флуоресцирующих МКА . 87
5.4. Оценка серологической активности флуоресцирующих препаратов после лиофилизации и в процессе хранения . 88
ГЛАВА 6. Применение агглютинирующих мка для идентификации холерных вибрионов о1 и о серогрупп в реакции слайд-агглютинации 91
6.1. Исследование агглютинабельности МКА, выделенных из АЖ и КЖ, в реакции слайд-агглютинации 91
6.2. Получение экспериментальных серий диагностических агглютинирующих МКА и их испытание на широком наборе штаммов 94
6.3 Стабильность лиофилизированных диагностических агглютинирующих МКА при хранении . 98
6.4. Оценка возможности применения диагностических наборов для выявления холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп, подвергнутых воздействию различных факторов 99
Заключение 103
Выводы 113
Список литературы 115
