Введение
ГЛАВА I. Литературный обзор 11
1.1. Характеристика определяемых аналитов: кортикостероидов, лекарственных стероидных соединений и нестероидных противовоспалительных средств (НПВС) 11
1.1.1. Кортикостероиды и лекарственные стероидные соединения 11
1.1.2. Свойства нестероидных противовоспалительных средств (НПВС) 12
1.2. Методы определения кортикостероидов и нестероидных противовоспалительных препаратов в биологических жидкостях 15
1.2.1. Иммунологические методы анализа 15
1.2.2. Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) 15
1.2.3. Метод капиллярного электрофореза 17
1.2.4. Современная тонкослойная хроматография (ТСХ) 22
1.2.4.1. Современные подходы к определению биологических соединений методом тонкослойной хроматографии 24
1.2.4.2. Неподвижные и подвижные фазы в ВЭТСХ 28
1.2.4.3. Параметры удерживания в ТСХ, эффективность и селективность разделения 29
1.2.4.4. Методы детектирования в тонкослойной хроматографии 30
1.3. Поверхностно-активные вещества (ПАВ) и макроциклические агенты, используемые при хроматографическом и электрофоретическом определении биологически активных соединений 32
1.3.1. Характеристика поверхностно-активных веществ и их применение в хроматографическом и электрофоретическом анализе 33
1.3.2. Циклодекстрины 37
1.4. Разделение энантиомеров нестероидных противовоспалительных средств в условиях ВЭТСХ 39
1.4.1. Теоретические основы хиральной хроматографии 39
1.4.2. Разделение энантиомеров в условиях ВЭТСХ 40
1.4.3. Прямой метод разделения 40
I.4.3.1. Типы хиральных селекторов 41
1.4.4. Лигандообменная хроматография 46
1.4.4.1. Механизм хирального разделения в лигандообменной хроматографии 47
1.4.4.2. Хиральное разделение методом лигандообменной хроматографии 48
1.4.5. Механизмы комплексообразования при хиральном разделении 49
1.5. Пробоподготовка биологических жидкостей при определении стероидных гормонов и нестероидных противовоспалительных средств 50
1.5.1. Сорбционное концентрирование и жидкостная экстракция 51
1.5.2. Сверхсшитый полистирол как материал для твердофазной экстракции 53
I.5.2.1. Физико-химические свойства полистирольных сеток 55
1.6. Характеристические профили биологически активных соединений для диагностики заболеваний 56
1.6.1. Электрофоретические профили биологически активных соединений 57
1.6.2. Хроматографические профили биологически активных соединений 61
I.7. Анализ многомерных данных 63
ГЛАВА II. Общая характеристика объектов и методов исследования. хемометрические подходы к обработке данных 66
11.1. Оборудование 66
11.2. Реагенты 68
11.3. Пробоподготовка биологических объектов к анализу 69
11.3.1. Жидкостная экстракция 70
11.3.2. Твердофазная экстракция (ТФЭ) 70
11.4. Методы исследования 75
11.4.1. Высокоэффективная жидкостная хроматография стероидных гормонов и лекарственных препаратов 75
11.4.2. Метод мицеллярной электрокинетической хроматографии (МЭКХ) при определении кортикостероидов и синтетических стероидных лекарственных средств 76
11.4.3. Высокоэффективная тонкослойная хроматография (ВЭТСХ) с денситометрическим детектированием 80
11.4.3.1. Определение стероидных гормонов и стероидных синтетических препаратов методом ВЭТСХ 80
11.4.3.2. Разделение энантиомеров нестероидных противовоспалительных средств методом ВЭТСХ 81
11.4.3.2.1. Модификация ТСХ-пластин 82
11.4.3.2.2. Установление пределов обнаружения и факторов разрешения энантиомеров нестероидных противовоспалительных средств (НПВС) 83
II.4.4. Спектральные методы, используемые для подтверждения комплексообразования энантиомеров НПВС с хиральными селекторами 85
II.4.4.1. УФ-спектроскопия 85
II.5. Получение и хемометрическая обработка стероидных профилей 86
ГЛАВА III. Определение эндо- и экзогенных стероидных гормонов методом ВЭТСХ 88
111.1. Аналитические характеристики метода 88
111.1.1. Установление факторов, влияющих на эффективность и селективность разделения природных и синтетических стероидных гормонов методом ВЭТСХ 88
111.1.2. Определение пределов обнаружения эндо- и экзогенных 97
стероидов 97
111.1.3. Подготовка биологических образцов (сыворотка крови, моча) к анализу методом ВЭТСХ 98
111.2. Анализ реальных объектов методом ВЭТСХ с
денситометрическим детектированием 102
ГЛАВА IV. Разделение энантиомеров нестероидных противовоспалительных средств (нпвс) методом ВЭТСХ 105
IV.1. Оптимизация условий разделения энантиомеров НПВС 105
IV.2. Возможность разделения энантиомеров НПВС в условиях лигандообменной хроматографии 109
IV.2.1. Применение комплексов меди(II) с L-аминокислотами для разделения энантиомеров НПВС методом ВЭТСХ 110 IV.3. Исследование процессов комплексообразования энантиомеров НПВС с хиральными селекторами методом УФ-спектроскопии 112
IV. 4. Определение нестероидных противовоспалительных средств в биологических жидкостях (моча) 114
ГЛАВА V. Практические приложения 115
V.1. Характеристические профили стероидных гормонов, полученные методом ВЭЖХ 115
V.2. Характеристические профили стероидных гормонов, полученные методом ВЭТСХ 127
V.3. Характеристические профили стероидных гормонов, полученные методом МЭКХ 129
V.4. Возможности и ограничения применения стероидных профилей в качестве дополнительного диагностического критерия некоторых эндокринных заболеваний 131
Выводы 137
Список сокращений 139
Список используемых медицинских терминов 142
Список используемой литературы
