Введение
1. Литературный обзор 9
1.1 Аллергия 11
1.2 Методы лечения аллергии 12
1.3 Механизмы АСИТ 13
1.4 Разновидности методов АСИТ 16
1.5 Основные виды аллергенов 18
1.6 Аллергены, используемые для АСИТ, и способы их модификации 24
1.7 Зависимость эффективности АСИТ от вводимой дозы 26
1.8 Системы адресной доставки лекарственных агентов на основе полимеров 28
1.9 Альгинат натрия (альгиновая кислота) 31
1.9.1 Биосовместимость 31
1.9.2 Инкапсуляция белков в альгинат 32
1.9.3 Высвобождение активных агентов 32
1.10 Хитин, хитозан и его производные 33
1.10.1 Свойства и области применения хитозана 34
1.10.2 Биосовместимость и биоразлагаемость хитозана 36
1.10.3 Методы получения хитозана 37
1.10.4 Модификация хитозана 40
1.10.5 Методы иммобилизации биоактивных лигандов на хитозан 42
1.11 Наночастицы на основе хитозана 44
1.11.1 Методы получения наночастиц на основе хитозана 46
1.11.2 Наночастицы ядро-оболочка на основе хитозана-альгината 56
1.12 Применение наночастиц хитозана 59
1.12.1 Пероральная, назальная и ингаляционная доставка лекарственных веществ 59
1.12.2 Доставка с помощью вакцин 60
2 Экспериментальная часть 62
2.1 Реагенты и растворители 62
2.2 Лабораторное оборудование 63
2.3 Методы 64
2.3.1 Методы работы с полимерами 64
2.3.2 Методы работы с белками 65
2.3.3 Методы работы с полимерными наночастицами: получение и определение параметров 68
2.3.4 Методы работы с животными 73
2.3.5 Статистическая обработка данных 78
3 Результаты собственных исследований 79
3.1 Получение частиц на основе рекомбинантных белков с оболочкой из хитозана и альгината 79
3.1.1 Получение и первичная характеристика рекомбинантных белков Derf 1, Derf 2, Asp f 2 и Asp f 3 79
3.1.2 Получение и физико-химические свойства наночастиц на основе хитозана и его производных 80
3.1.3 Характеристика производных хитозана с различными гидрофобными заместителями 82
3.1.4 Формирование наночастиц на основе гидрофобизованных производных хитозана методом самосборки 83
3.1.5 Характеристика хитозанов с разной степенью замещения карбоксильными группами 84
3.1.6 Выбор молекулярной массы хитозана, размера частиц и исходной концентрации полимера 87
3.1.7 Получение частиц из лаурилсукциноилхитозана методом самосборки 89
3.1.8 Включение рекомбинантных белков в состав наночастиц 92
3.1.9 Характеристика частиц, содержащих аллергены. 96
3.1.10 Получение двухслойных частиц белок-хитозан-альгинат 97
3.1.11 Получение частиц методом электроспрея 100
3.2 Иммунологическая характеристика капсулированных аллергенов 105
3.2.1 Распознавание белков-аллергенов IgE антителами из сывороток больных 105
3.2.2 Разработка ИФА для анализа распознавания сывороточными IgE капсулированные антигены 107
3.2.3 Анализ связывания капсулированных аллергенов с IgE 108
3.2.4 Анализ иммунного ответа на капсулированные белки 110
3.3 АСИТ капсулированными аллергенами 119
3.3.1 Индукция аллергии на белки Asp f 2иAsp f 3 у мышей 119
3.3.2 Эффект иммунизации капсулированными аллергенами на продукцию IgG и IgE антител 121
3.3.3 Эффект иммунизации капсулированными аллергенами на системную реакцию 123
4 Заключение 125
5 Выводы 128
6 Список сокращений 129
7 Список литературы 131
