Введение
1. Обзор литературы 13
1.1. Общая характеристика аденовирусов 13
1.2. Аденовирусная инфекция крупного рогатого скота 13
1.3. Структурная характеристика аденовириона 16
1.3.1. Строение нуклеокапсида 16
1.3.2.Физико-химические свойства структурных белков аденовириона 18
1.3.3. Основной структурный белок аденовириона - гексон 18
1.3.4. Структурные белки аденовириона 20
1.4. Иммунохимические свойства аденовирусных белков 21
1.4.1. Антигенная структура белков аденовирусов 21
1.4.2. Антигенные свойства гексона 23
1.5.Основные методы диагностики вирусных болезней животных 25
1.5.1. Лабораторная диагностика аденовирусной инфекции крупного рогатого скота 27
1.6. Иммуноферментный анализ 31
1.7. Иммуноферментный анализ, как метод диагностики аденовирусной инфекции 35
1.7.1. Иммуноферментный анализ, как метод выявления антител к аденовирусам крупного рогатого скота 36
1.7.2. Иммуноферментный анализ, как метод обнаружения аденовирусных антигенов 43
2. Материалы и методы 46
2.1. Материалы 46
2.1.1. Биологические препараты 46
2.1.2. Реактивы 47
2.2. Методы исследования 48
2.2.1. Получение монослойной культуры клеток перевиваемой линии MDBK 48
2.2.2. Получение монослойной культуры клеток перевиваемой линии Т-1 49
2.2.3. Получение монослойной культуры клеток ТБ 49
2.2.4.Культивирование аденовируса крупного рогатого скота первого серотипа 49
2.2.5.Культивирование аденовируса крупного рогатого скота седьмого серотипа 51
2.2.6.Экстракция гексонов аденовирусов 51
2.2.7 Гидрофобная хроматография 52
2.2.8.Анионообменная хроматография 53
2.2.9. Электрофорез в полиакриламидном геле 55
2.2.10. Непрямой иммуноферментный анализ 56
2.2.12. Реакция нейтрализации 59
2.2.13. Реакция непрямой гемагглютинации 60
3. Результаты исследований 61
3.1. Культивирование аденовирусов первой и второй подгрупп 61
3.1.1. Культуры клеток 61
3.1.2. Методы культивирования аденовирусов 62
3.2. Получение реагентов набора ИФА 64
3.2.1. Получение аденовирусных антигенов 64
3.2.2. Получение гипериммунных сывороток к гексонам аденовирусов 68
3.2.3. Определение оптимальных условий проведения ИФА 72
3.3. Апробация набора реагентов ИФА 84
3.4. Сравнительная характеристика метода ИФА 90
4. Обсуждение результатов 93
5. Выводы 108
6. Практические предложения 111
Список литературы 112
Приложение 127
