Введение
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 11
1.1. Возбудитель плевропневмонии свиней A. pleuropneumonia 11
1.1.1. История открытия возбудителя и его систематическое положение 12
1.1.2. Биологические свойства возбудителя 13
1.1.3. Серологическая дифференциация A.pleuropneumoniae 14
1.2. Роль A. pleuropneumoniae в патологии животных 15
1.2.1. Факторы вирулентности A. pleuropneumoniae 16
1.2.2. Эпизоотологические особенности и клинические признаки заболевания 18
1.3. Роль серологических методов и иммуноферментиого анализа в
диагностике актинобациллезной плевропневмонии 20
1.3.1. Диагностика актинобациллезной плевропневмонии1 свиней 20
1.3.2. Иммуноферментный анализ 23
1.3.2.1 Непрямой метод ИФА . 24
1.3.2.2 Интерпретация результатов ИФА 27
1.3.3. Применение ИФА для выявления антител к бактериям A pleuropneumoniae 28
1.4. Особенности технологии производства бактериальных диагностикумов (антигенов и диагностических сывороток) 32
1.5. Заключение по обзору литературы 34
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 35
2.1. Материалы 35
2.1.1. Штаммы и изоляты микроорганизмов 35
2.1.2. Питательные среды 36
2.1.3. Лабораторные животные . 37
2.1.4. Сыворотки 37
2.1.5. Растворы и реактивы 37
2.1.6. Оборудование . 39
2.2. Методы 40
2.2.1. Методы изучения биологических свойств микроорганизмов 40
2.2.2. Получение бактериальных антигенов 41
2.2.3. Определение активности и специфичности антигенов 43
2.2.4. Получение нормальных и специфических сывороток крови животных 46
2.2.5. Определение серовариантнои принадлежности штаммов A.pleuropneumoniae 48
2.2.6. Постановка непрямого твердофазного варианта ИФА для выявления антител к бактериям A.pleuropneumoniae 50
, 2.2.7. Статистическая обработка результатов 51
2.3. Результаты собственных исследований 52
2.3.1. Биологические свойства штаммов бактерий A.pleuropneumoniae, выделенных на территории РФ 52
2.3.2. Определение серовариантнои принадлежности штаммов A.pleuropneumoniae 55
2.3.2.1. Определение серовариантнои принадлежности штаммов A.pleuropneumoniae в РА на стекле 55
2.3.2.2. Определение серовариантнои принадлежности штаммов A.pleuropneumoniae в РДП , 57
2.3.2.3. Определение серовариантнои принадлежности штаммов A.pleuropneumoniae в РА -. 58
2.3.3. Выбор антигена A.pleuropneumoniae для ИФА 61
2.3.4. Разработка иммуноферментной тест-системы для определения антител к бактериям A.pleuropneumoniae 63
2.3.4.1. Оптимизация условий постановки непрямого варианта ИФА 63
2.3.4.2. Определение оптимальных разведений антигена и конъюгата....66
2.3.4.3. Получение комбинированного антигена 69
2.3 А А. Выбор условий хранения комбинированного антигена на планшетах 70
2.3.4.5 Сравнительная оценка результатов выявления антител к бактериям
A.pleuropneumoniae в непрямом варианте ИФА и в РА 71
2.3.4.6. Разработка иммуноферментной тест-системы для выявления
антител к бактериям A.pleuropneumoniae при тестировании сывороток крови свиней в одном разведении 73
2.3.4.6.1. Определение рабочего разведения сыворотки крови свиней и расчет титра антител 74
2.3.4.6.2. Определение допустимых величин оптической плотности для контрольных положительной и отрицательной сывороток 77
2.3.4.6.3. Определение позитивно — негативного порога 79
2.3.4.6.4. Сравнение чувствительности и специфичности разработанной иммуноферментной тест-системы с РА и коммерческим набором ИФА 81
2.3.5. Иммунологический мониторинг свинопоголовья в отношении
возбудителя актинобациллезной плевропневмонии на свинокомплексах
Российской Федерации 83
2.3.5.1. Определение динамики накопления поствакцинальных антител..83
2.3.5.2. Серологический мониторинг в отношении возбудителя
актинобациллезной плевропневмонии на свинокомплексах РФ, проведенный
с применением разработанных наборов ИФА 85
2.3.6. Технологическая схема производства иммуноферментных наборов
для определения антител к бактериям A.pleuropneumoniae 87
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ 90
4. ВЫВОДЫ 97
5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 98
6. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 100
7. ПРИЛОЖЕНИЯ 120
