Введение
1. Обзор литературы 14
1.1. Семейство белков человеческого интерферона альфа 14
1.2. Влияние наличия N-кондевого метионина в молекуле интерферона 17 альфа-2 на свойства белка
1.3. Существующие в настоящее время способы получения интерферона
Современные требования к параметрам качества субстанции интерфе
Способы получения интерферона без N-концевого метионина в Е. coli. 26
1.6. Технология получения рекомбинатных белков в Е. coli 31
1.7. Обеспечение безопасности получаемого препарата для пациента 35
2.Собственные исследования 36
2.1. Материалы и методы исследований 36
2.2. Результаты исследований 48
2.2.1. Разработка технологии производства безметионинового интерферона альфа
2.2.1.1. Создание штамм а-продуцента гибридного белка интерферона аль
2.2.1.2. Исследование влияния замены редко встречающихся в Е. coli ами- 53 нокислотных кодонов на уровень экспрессии гена интерферона альфа-2Ь человека в системе транскрипции бактериофага Т7
2.2.1.3. Разработка процесса культивирования штамма-продуцента гибридного белка интерферона альфа-2Ь
2.2.1.3.1. Подбор оптимального состава культуральной среды 59
2.2.1.3.2.Азотсодержащий компонент 61
2.2.1.3.3. Минеральные соли 66
3.4. Факторы роста 51
2.2.1.3.5. Состав питательной среды для культивирования штамма ECR- 74 HSI
2.2.1.3.6. Подбор оптимальных условий культивирования 74
2.2.1.3.7.Подбор схемы получения инокулята 78
2.2.1.3.8. Углеродсодержащие субстраты и индуктор 79
2.2.1.3.9. Проведение установочных серий процесса культивирования в объеме 30л
2.2.1.4. Разработка процесса выделения и очистки тел включений гибрид- 106
ного белка интерферона альфа-2Ь
2.2.1.4.1. Подбор оптимальных условий процесса выделения и очистки телец включений
2.2.1.5. Растворение, ренатурация и гидролиз гибридного белка 116
2.2.1 ..Очистка субстанции человеческого рекомбинантного безметиони- 121
нового интерферона альфа-2Ь
2.2.1.7. Исследование полученного человеческого рекомбинантного альфа- 127 2Ь безметионинового интерферона методом автоматического N-концевого секвенирования
2.2.1.8. Определение подлинности человеческого рекомбинантного безме- тионинового интерферона альфа-2Ь методом пептидного картирования в сравнении с Европейским стандартным образцом
2.2.1.9. Технологическая схема 139
2.2.1.10. Валидация технологического процесса производства человече- 140
ского рекомбинантного безметионинового интерферона альфа-2Ь
2.2.1.12. Экономическая эффективность процесса 150
2.2.1.13. Перенос технологии на производственную площадку ООО «Фар- 152
мапарк» 2.2.2. Разработка технологии производства безметионинового интерферо- 152
на альфа-2а 2.2.2.1. Создание штамма-продуцента гибридного белка интерферона аль- 153 фа-2а 2.2.2.2. Разработка процесса культивирования штамма-продуцента гибридного белка интерферона альфа-2а
3. Обсуждение полученных результатов 158
4. Выводы 162
5. Практическое использование полученных 164 результатов
6. Рекомендации по использованию научных выводов... 165
7. Список литературы
