Введение
ГЛАВА 1. Современное состояние оценки безопасности и качества объектов ветеринарно-санитарного контроля
Критерии и методы оценки безопасности и качества животноводческих производств и продукции 16
Микробные контаминации и их оценка 20
Идентификация продукции и определение фальсифицирующих примесей 53
Методы генной диагностики и их роль в оценке безопасности и качества объектов ветеринарно-санитарного контроля 65
Автоматизированные системы и приборы контроля качества и безопасности 92
ДНК-микрочиповая технология 98
Собственные исследования 105
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследований 105
Микробиологические методы исследований 105
Методы бактериологического анализа эшерихий, сальмонелл, стафилококков 106
Определение чувствительности бактерий к действию антибиотиков 109
Метод выращивания бактерий в полужидком агаре на мембранных фильтрах 109
Получение и определение L-форм бактерий 110
Электронномикроскопические исследования ПО
Методы ДНК-диагностики
2.3.1. Выделение и очистка ДНК бактерий 111
2.3.2. Выделение и очистка ДНК из тканей животных 113
2.3.3. Включение тритиевой метки в ДНК методом ник-трансляции 114
2.3.4. Включение биотиновой метки в ДНК методом ник-трансляции 115
2.3.5. Включение метки в ДНК методов «рассеяной» затравки 116
2.3.6. Получение меченых ДНК-зондов с помощью полимеразной цепной реакции 117
2.3.7. Точечная ДНК-гибридизация с биотиновой меткой 118
2.3.8. Гибридизация ДНК с тритиевой меткой 119
2.3.9. ДНК-гибридизация с использованием тест-набора с ДНК-зондами меченными биотином 120
2.3.10. Методика гибридизации колоний 125
2.3.11. Методика полимеразной цепной реакции
2.4. Методика иммудиффузии в геле 127
2.5. Статистическая обработка результатов 128
Результаты исследований 129
ГЛАВА 3. Разработка методов и тест-систем индикации и идентификации микроорганизмов в объектах ветеринарно санитарного контроля на основе ДНК-диагностики 129
3.1. Идентификация бактерий в объектах ветеринарно-санитарного и экологического контроля на основе гомологии нуклеиновых кислот методом гибридизации колоний 129
3.2. Разработка модификации метода ускоренной идентификации бактерий на основе гомологии ДНК меченной биотином 136
3.3. Разработка тест-систем индикации бактерий с использованием генных зондов 145
3.4. Разработка метода дифференциального определения вегетативных и L-форм бактерий в объектах ветеринарно-санитарного контроля с использованием ДНК-гибридизации
на мембранных фильтрах 161
Индикация бактерий в объектах ветеринарно-санитарного контроля на основе ПНР с меченными дезоксинуклеозидтрифосфатами 184
ГЛАВА 4. Разработка методов и тест-систем идентификации видовой принадлежности мяса и мясопродуктов 196
Разработка методов и тест-систем идентификации говядины на основе ДНК-диагностики 196
Разработка тест-системы определения видовой принадлежности мяса и субпродуктов на основе иммунодиффузии в геле 205
ГЛАВА 5. Приборная реализация ускоренных методов оценки безопасности качества 207
Разработка автоматизированных систем на основе ДНК диагностики
Разработка тест-систем и технических средств для проведения анализа в нестационарных условиях 220
ГЛАВА 6. Обсуждение результатов 233
Выводы 256
Предложения для практики 259
Список литературы
