Введение
I. Литературный обзор 11
1.1. Характеристика вирусов гриппа 11
1.1.1. Классификация 11
1.1.2. Организация вириона и функции вирусных белков 11
1.1.3. Клинические признаки и патогенез 17
1.1.4. Эпизоотология и эпидемиология гриппа А 21
1.2. Диагностика гриппа А 26
1.2.1. Вирусологичекая диагностика 27
1.2.2. Серологическая диагностика 29
1.2.3. Обнаружение вирусного антигена 34
1.2.4. Молекулярная диагностика 37
1.3. Заключение по литературному обзору 46
II. Материалы и методы 48
2.1. Материалы 48
2.1 Л. Штаммы и изоляты вирусов гриппа А 48
2.1.2. Химические реагенты 50
2.1.3. Реагенты и наборы для молекулярной биологии 51
2.1.4. Оборудование 52
2.1.5. Расходные материалы и лабораторная посуда 53
2.2. Методы 53
2.2.1. Вьщеление РНК вирусов гриппа из культуральных и полевых образцов 53
2.2.2. Постановка ОТ-ПЦР для обнаружения РНК вируса гриппа А 54
2.2.3. Постановка ОТ-ПЦР для обнаружения РНК вируса гриппа А и дифференциации его подтипов Н5 и Н7 56
2.2.4. Постановка ОТ-ПЦР для обнаружения РНК вируса гриппа А подтипа Н5 в реальном времени 56
2.2.5. Электрофорез ДНК в агарозном геле 57
2.2.6. Анализ результатов ОТ-ПЦР в реальном времени 57
2.2.7. Конструирование рекомбинантных положительных контролен 58
III. Результаты 61
3.1. Разработка детекционной системы ОТ-ПЦР для обнаружения вируса гриппа А на основе "гнездовой" ПЦР 61
3.2. Разработка детекционной системы ОТ-ПЦР для обнаружения и дифференциации вируса гриппа А подтипов Н5 и Н7 на основе "гнездовой" ПЦР 68
3.3. Разработка детекционной системы ОТ-ПЦР для обнаружения вируса гриппа А подтипа Н5 с режимом получения результатов в реальном времени 73
3.4. Определение распространенности вируса гриппа А на территории Российской Федерации 77
IV. Обсуждение 88
V. Выводы 96
VI. Приложения 97
VIII. Библиографический список 103
