Введение
1. Обзор литературы 9
1.1. Морфогенез в культуре клеток in vitro 9
1.1.1. Типы морфогенеза 10
1.1.2. Основные пути регенерации растений in vitro 11
1.1.2.1. Гемморизогенез 12
1.1.2.2. Соматический эмбриогенез 15
1.1.2.3. Особенности регенерации растений из протопластов 31
1.2. Сомаклональная вариабельность 35
1.2.1. Уровни изменчивости генетического аппарата, наблюдаемые в культуре in vitro 36
1.2.2. Факторы, обусловливающие сомаклональную изменчивость 36
1.2.3. Предполагаемые механизмы сомаклональной изменчивости 44
1.2.4. Подходы и методы выявления сомаклональной изменчивости 47
1.3. Гречиха как объект для биотехнологических исследований 50
2. Материалы и методы исследований 53
2.1. Объект исследования 53
2.2. Методы исследования 53
2.2.1. Получение стерильных проростков 53
2.2.2. Выделение и культивирование протопластов и регенерация из них растений 53
2.2.3. Регенерация растений из тканей гипокотилей гречихи 56
2.2.4. Цитогенетический анализ 57
2.2.5. Гистологический анализ 58
2.2.6. Биохимический анализ растений-регенерантов 59
2.2.6.1. Выделение фракции растворимых белков 59
2.2.6.2. Электрофорез белков 60
2.2.7. Статистическая обработка результатов наблюдений 61
2.2.7.1. Подсчет протопластов 61
2.2.7.2. Анализ распределения хромосомных чисел у регенерантов 61
2.2.7.3. Анализ аберраций у растений-регенерантов 64
2.2.7.4. Анализ электрофореграмм белков 64
3. Результаты и обсуждение 65
3.1. Регенерация в культуре гипокотилей проростков гречихи 65
3.1.1. Выбор экспланта 65
3.1.2. Регенерация растений через протопласты 67
3.1.2.1. Эффективность выделения протопластов при использовании различных ферментных композиций 67
3.1.2.2. Культивирование протопластов и регенерация растений культурной гречихи 71
3.1.3. Регенерация через соматический эмбриогенез и геммогенез 77
3.1.3.1. Образование проэмбриогенных клеточных комплексов. Факторы, влияющие на их образование 77
3.1.3.2. Гистологическое исследование процесса формирования ПЭКК 93
3.1.3.3. Регенерация растений из проэмбриогенных клеточных комплексов 98
3.2. Анализ растений-регенерантов на сомаклональную вариабельность ... 103
3.2.1. Фенотипическая изменчивость 103
3.2.2. Генетическая изменчивость 105
3.2.2.1. Анализ хромосомных чисел 105
3.2.2.2. Анализ хромосомных аберраций ПО
3.2.3. Биохимическая изменчивость 114
Заключение 119
Выводы 121
Список литературы 123
