Введение
1. Обзор литературы 16
1.1. Основные белки, обеспечивающие сократимость гладких мышц 16
1.1.1. Актин 16
1.1.2. Миозин 21
1.1.3. Тропомиозин
1.1.3.1. Структура и взаимодействия с актином 31
1.1.3.2. Структурно-функциональные аспекты
1.1.4. Кальдесмон 38
1.1.5. Кальпонин 41
1.1.5.1. Структура кальпонина и его взаимодействия с актином и другими бел ками 41
1.2. Регуляция сокращения гладких мышц 51
1.2.1. Регуляция тропомиозином 54
1.2.2. Регуляция кальдесмоном 55
1.2.3. Регуляция кальпонином 61
1.3. Механизмы ингибирования АТФазной активности в мышцах 64
1.3.1. Механизм ингибирования тропонин-тропомиозином
1.3.2. Механизм ингибирования кальдесмоном 69
1.3.3. Механизм ингибирования кальпонином 73
1.4. Кальпониноподобные белки 76
2. Методы исследования 82
2.1. Выделение миозина из скелетных мышц кролика 82
2.2. Получение субфрагмента-1 миозина 83
2.3. Получение ацетонового порошка скелетных мышц кролика 84
2.4. Выделение G-актина из ацетонового порошка 84
2.5. Выделение тропомиозина из ацетонового порошка 85
2.6. Мечение мышечных белков флуоресцентными зондами 86
2.7. Определение концентрации белков 89
2.8. Электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия 89
2.9. Измерение актин-миозиновой АТФазной активности 2.10. Коседиментация Сар с актином 91
2.11. Определение кинетических параметров Vmax и KATPase взаимодействия актина и S1 92
2.12. Получение глицеринизированных мышечных волокон 92
2.13. Получение «теневых» мышечных волокон 93
2.14. Получение «реконструированных» мышечных волокон .93
2.15. Декорирование теневых мышечных волокон мечеными белками 94
2.16. Метод поляризационной микрофлуориметрии 94
3. Результаты и обсуждение 97
3.1. Влияние Сар на циклическую работу головки миозина в АТФазном цикле (Сиренко и др., 2012, 2014) 97
3.2. Подвижность и расположение Сар на тонких нитях теневого мышечного волокна при моделировании различных стадий цикла гидролиза АТP (Сиренко и др., 2012) 104
3.3. Влияние Сар на конформационные изменения мономеров актина и упругость актиновой нити в процессе моделирования АТФазного цикла (Сиренко и др., 2013) 108
3.4. Параметры связывания Сар с Ф-актином in vitro 120
3.5. Ингибирующее влияние Сар на АТФазную активность акто-S1 (Сиренко и др., 2014) 122
3.6. Определение механизма ингибирования белком Сар актин-миозинового взаимодействия по значению параметров Vmax и KATPase
Заключение 133
5. Выводы 136
6. Список цитируемой литературы
