Введение
Глава 1. Обзор литературы 14
1.1. Современная классификация генов цитохрома Р450 18
1.2. Типы индукторов цитохрома Р450 18
1.3. Активность и индуцибельность цитохромов Р450 в онтогенезе 19
1.3.1. Общие аспекты развития монооксигеназной системы печени животных и человека 19
1.3.2. Развитие активностей цитохрома Р450 в эмбриональный период жизни 20
1.3.3. Развитие микросомных монооксигеназ печени у животных раннего неонатального периода 23
1.3.4. Регуляция активности CYP в эмбриональный и неонатальный периоды жизни 25
1.3.5. Множественные формы цитохрома Р450 в разные периоды развития. Неонатальный импринтинг 28
1.4.Тканеспецифичность индукции цитохромов Р450 34
1.5. Характеристика цитохромов Р450 подсемейства 1А 40
1.5.1. Индукция цитохрома Р450 1А1 41
1.5.2. Индукция цитохрома Р450 1А2 48
1.6. Активация генов подсемейства CYP2B барбитуратами и другими соединениями 52
І.б.І.Характеристика цитохромов подсемейства Р450 2В 52
1.6.2. Механизм индукции CYP2B барбитуратами 55
1.7. Генетический полиморфизм цитохромов Р450 и химический канцерогенез 66
1.7.1. Полиморфизм CYP человека 66
1.7.2. Межлинейные различия в активности цитохрома Р450 у лабораторных животных 70
1.8. Цитохром Р450 в метаболизме эндогенных соединений 72
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследований 77
2.1 Материалы 77
2.2. Плазмиды 78
2.3. Животные. 79
2.4. Обработка животных индукторами 79
2.5. Выделение микросом 80
2.6. Определение белка 80
2.7. Определение количества цитохромов Р450 и 65 81
2.8. Определение активности НАДФН-цитохролі Р450редуктазы 81
2.9. Определение каталитической активности форм CYP 82
2.9.1 Гидроксилирование БП 82
2.9.2. О-деалкилированиеэтоксирезоруфинов 82
2.9.3. N-деметилирование бензфетамина 83
2.9.4. Метаболизм алдрина 83
2.9.5. Метаболизм андростендиона 84
2.10. Иммунохимические методы 85
2.10.1.Получение антител 85
2.10.2. Ракетный иммуноэлектрофорез 85
2.10.3. Ингибирование метаболизма различных субстратов антителами 86
2.11. Получение очищенных препаратов цитохрома Р450. 86
2.12. Очистка НАДФН-цитохром Р450редуктазы 89
2.13. DcNa-гель электрофорез и иммуноблотинг белков микросом 90
2.14. Приготовление радиоактивных зондов 91
2.15. Гидролиз ДНК эндонуклеазами рестрикции 92
2.16. Получение двухцепочечных фрагментов ДНК из олигонуклеотидов 92
2.17. Выделение суммарной РНК из клеток печени 92
2.18. Электрофорез РНК и ДНК 93
2.19. Гибридизация РНК 94
2.20. Полимеразная цепная реакция 95
2.21. Выделение белковых ядерных экстрактов 96
2.22. Анализ ДНК-белковых комплексов методом задержки ДНК в геле. 97
2.22.1. Инкубация олигонуклеотидов с белками ядерных экстрактов из печени крыс, индуцированных ксенобиотиками 97
2.24.1. Инкубация олигонуклеотидов с белками ядерных экстрактов из печени контрольных крыс при добавлении индукторов в условиях in vitro 98
2.23. Статистическая обработка результатов 98
ГЛАВА 3. Результаты исследований 99
3.1. Идентификация молекулярных форм цитохрома Р450, изолированных из печени крыс, индуцированных фенобарбиталом и 3-метилхолантрепом 99
3.2. Оценка каталитической активности множественных форм цитохрома Р450 в микросомах печени крыс по метаболизму андростендиона 106
3. 3. Активность цитохромов Р4501А и 2В в печени новорожденных крыс 114
3.3.1. Характеристика форм CYP, индуцированных в печени неонатальных крыс 116
3.3.2. Иммунохимическое определение индуцированных форм CYP 117
3.3.3. Метаболизм специфических субстратов МОС печени крыс раннего неонатального периода 119
3.3.4. Каталитическая активность индуцированных форм CYP у новорояеденных крыс 121
3.4. Иследование экспрессии генов цитохромов Р4501А в печени и легких крыс, индуцированных различными ксенобиотиками 125
3. 5. Характеристика CYPla печени мышей различных линий 132
3.6. Межлинейные различия в ферментативной активности CYP2B1 и экспрессии его гена в печени крыс при индукции фенобарбиталом и трифенилдиоксаном 136
3.7. Регуляция экспрессии гена CYP2B индукторами ФБ-типа 141
3.7.1. Исследование активности цитохрома Р4502В1 и экспрессии его гена при индукции ФБ и ТФД 141
3.7.2. Исследование взаимодействия позитивного и негативного цис-активных элементов гена CYP2B2 с ядерными белками печени крыс в разное время после введения им индукторов 144
3.7.3. Исследование взаимодействия позитивного и негативного цис-активных элементов гена CYP2B2 с ядерными белками печени крыс
при добавлении индукторов в системе in vitro 150
3.8. Альтернативный сплайсинг мРНК цитохрома Р450 2В2 в печени крыс 155
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов 159
Заключение 179
Выводы 180
Список цитируемой литературы
