Введение
Глава 1. CLASS Обзор литератур CLASS ы 9
1.1. Поведенческие реакции водорослей 9
1.1.1. Феноменология процессов и их классификация 9
1.1.2. Светозависимые поведенческие реакции 10
1.1.3. Хемотаксис 19
1.1.4. Аэротаксис 23
1.1.5. Магнитотаксис 23
1.1.6. Гравитаксис 24
1.2. Транспорт аммония у эукариот 26
1.2.1. Системы транспорта аммония у высших растений 26
1.2.2. Системы транспорта аммония у грибов 29
1.2.3. Системы транспорта аммония у Dictyostelium discoideum ЗО
1.2.4. Системы транспорта аммония у Chlamydomonas reinhardtii..31
1.3. Ассимиляция аммония у Chlamydomonas reinhardtii 36
Глава 2. Материалы и методы 41
2.1. Объекты исследования 41
2.2. Условия культивирования 42
2.3. Капиллярный метод изучения хемотаксиса 42
2.4. Определение 2-кето-кислот 43
2.5. Получение и определение количества образовавшихся гамет 43
2.6. Метод тетрадного анализа 44
2.7. Получение автолизина 45
2.8. Генетическая трансформация 45
2.9. Блот-гибридизация по Саузерну 48
2.10. Определение поглощения [14С]-метиламмония 48
2.11. Выделение тотальной ДНК и РНК 49
2.12. Метод ПЦР с предшествующей обратной транскрипцией 50
2.13. Метод ПЦР в режиме реального времени 51
2.14. Сайт-специфическая амплификация методом ПЦР 52
2.15. Секвенирование продуктов ПЦР 54
Глава 3. Результаты и обсуждение 56
3.1. Хемотаксис С. reinhardtii на разных этапах жизненного цикла. 56
3.1.1. Вегетативные клетки 57
3.1.2. Прегаметы и гаметы 60
3.1.3. Сигнальная функция света 62
3.1.4. Характеристика мутантов, способных к гаметогенезу в отсутствии светового сигнала 63
3.2. Роль ионов аммония в процессе преобразования системы хемотаксиса при гаметогенезе 64
3.2.1. Действие аминокислот на изменение хемотаксиса к аммонию в процессе гаметогенеза 65
3.2.2. Контроль дедифференцировки гамет ионами аммония 68
3.2.3. Действие мочевины на изменение хемотаксиса к аммонию в процессе гаметогенеза 70
3.2.4. Действие 0,1 -метионин-0,1 -сульфоксимина на хемотаксис к аммонию 71
3.3. Транспортеры аммония и их роль на разных этапах жизненного цикла С. reinhardtii 74
3.3.1. Системы LATS и HATS 74
3.3.2. Хемотаксис мутантов с повреждениями транспортера АМТ1;4 76
3.3.3. Получение и характеристика мутанта с нарушенной активностью системы HATS 78
Заключение 90
Выводы 93
Список литературы: 95
