Введение
ГЛАВА I. Обзор литературы 11
1. Биологические, энзимологические и генетические аспекты GXC у прокариот 11
1.1. GKC: обнаружение, свойства, распространение, функции 11
1.2. Номенклатура и классификация ферментов СХС 14
1.2.1. Ферменты П класса 15
1.2.2. Изомерия рестриктаз и метилаз 19
1.2.3. Ферменты I класса 21
1.2.4. Ферменты Ш класса 25
1.3. Генетические детерминанты СХС 26
1.3.1. Хромосомные СХС 27
1.3.2. Профаговые СХС 29
1.3.3. Плазмидные СХС 30
1.3.4. Распространение R -факторов в сем. Enterobacteriaceae 33
1.4. Заключение 35
2. Методы выделения и очистки специфических эндонуклеаз 36
2.1. Разрушение клеток ч 36
2.2. Удаление нуклеиновых кислот и балластных белков 38
2.3. Гельфильтрация 39
2.4. Ионообменная хроматография 43
2.5. Аффинная хроматография 45
2.6. Гидрофобная хроматография 50
2.7. Заключение 52
ГЛАВА 2. Материалы и методы 55
1. Материалы 55
2. Методы 56
ГЛАВА 3. Результаты собственных исследований 63
1. Объект исследования 63
1.1. Постановка проблемы и выбор объекта исследования 63
1.2. Культивирование штаммов-продуцентов рест-риктаз 65
2. Рестриктирующий компонент СХС Есо СК 68
2.1. Выделение и очистка рестриктазы Есо СК 68
2.2. Субстратная специфичность КЕСО ОК 8
2.3. Физическое картирование ДНК фага И 83
3. Рестриктирующий компонент СЕКС Sso 47 86
3.1. Выделение и очистка 86
3.1.1. Идентификация суммарной рестрикти-рующей активности аффинной хроматографией на голубой сефарозе . 86
3.1.2. Ионообменная хроматография 91
3.1.3. Очистка HSso и гидрофобной хроматографией на фенил-сефарозе 98
3.1.4. Изоэлектрофокусирование на амфолинах 102
3.1.5. Исследование ферментных препаратов ESSO I И Есо EI МеТОДОМ ЭЛеКТрО-
фореза в ПААГ 114
3.2. Свойства рестрикгирующих эндонуклеаз из штамма s.sonnei 47 И5
3.3. Специфичность RSso I и ESso II 122
3.3.1. Субстратная специфичность 123
3.3.2. Изучение первичной структуры участков узнавания RSso їй RSso и 126
3.4. Использование рестриктаз из s.sonnei 4-7 в генной инженерии 137
ГЛАВА 4. Обсуждение І45
Выводы 161
Список литературы 163
