Введение
Глава 1. Общие сведения о вирусе гепатита С 10
1.1. Вирус гепатита С - строение, распространенность
и пути передачи 10
1.2. Клиническое течение гепатита С 14
1.3. Патологические изменения в печени при гепатите С 17
Глава 2. Молекулярная организация и иммунологические свойства вируса гепатита С 18
2.1 .Организация вирусного генома 18
2.2. Структура и функции вирусных белков 22
2.3. Гуморальный и клеточный иммунные ответы при ВГС-инфекции 29
Глава 3. Молекулярные основы диагностики гепатита С 34
3.1. Выявление антител к белкам ВГС 34
3.2. Детекция РНК ВГС 36
3.3. Выявление вирусных белков 44
Собственные исследования материалы и методы 47
Глава 4. Материал от больных 47
Глава 5. Детекция РНК вируса гепатита С 48
5.1. Выделение РНК ВГС 48
5.2. Детекция геномной РНК ВГС 49
5.3. Выявление репликативной формы РНК вируса гепатита С .
Глава 6. Получение МКА к рекомбинантному белку NS4 вируса гепатита С 53
6.1. Рекомбинантный белок NS4 вируса гепатита С 53
6.2.Синтетические петиды 53
6.3. Иммунизация 53
6.4. Миеломная клеточная линия 54
6.5. Культивирование клеток 54
6.6. Слияние клеток и выращивание гибридом 54
6.7. Скрининг гибридом 55
6.8. Криоконсервирование гибридом 56 6.9.Получение асцитных жидкостей, содержащих МКА 56
6.10.Выделение МКА из асцитных жидкостей 56
6.11 .Определение концентрации белка 56
6.12. Субтипирование МКА и определение типов легких цепей в составе иммуноглобулинов 57
6.13. Твердофазный ИФА 57
6.14. Иммуноблот 57
6.15. Эпитопное картирование МКА 5 7
6.16. Конкурентный т-ИФА 58 Глава 7. Детекция белка NS4 ВГС in situ
7.1. Приготовление препаратов изолированных клеток 58
7.2. Получение криостатных срезов печени 58
7.3. Выделение лимфоцитов из цельной крови 59
7. 4. Непрямой иммунофлюоресцентный анализ (нИФ) 59
7.5. Непрямой иммуноферментный анализ in situ 59
Глава 8. Статистическая обработка результатов Результаты исследований 61
Глава 9. Выявление РНК ВГС 61
9.1 .Выявление геномной РНК ВГС 61
9.2. Детекция минус-РНК ВГС 63
9.3.Выявление РНК ВГС после интерферонотерапии 69
Глава 10. Получение и характеристика МКА 71
10.1. Слияние и скрининг гибридом 71
10.2. Характеристика МКА к белку NS4 71 10.3 .Эпитопная специфичность МКА 73 10.4. Реципрокный конкурентный анализ МКА 75
Глава 11. Выявление натурального белка NS4 ВГС 77
11.1. Детекция NS4 в изолированных инфицированных гепатоцитах 77
11.2. Изучение экспрессии белка NS4 ВГС на криостатных срезах печени 77
11.3. Выявление белка NS4 в лимфоцитах периферической крови 81
Обсуждение результатов исследований 83
Выводы 103
Список литературы
