Введение
Глава 1. Обзор литературы ц
1.1. Система фактора некроза опухоли альфа и его рецепторов: структура, функции и регуляция 11
1.2. Молекулярные механизмы регуляции апоптоза, опосредованные фактором некроза опухоли альфа 20
1.3. Механизмы нарушения апоптоза, регулируемого фактором некроза опухоли альфа, и их роль в патогенезе различных заболеваний 31
Заключение 41
Глава 2. Материал и методы исследования
2.1. Материал исследования 43
2.1.1. Характеристика экспериментального блока исследования
2.1.2. Характеристика клинического блока исследования 45
2.2. Методы исследования 47
2.2.1. Выделение лимфоцитов крови 47
2.2.2. Культивирование лимфоцитов крови 48
2.2.3. Оценка реализации апоптоза лимфоцитов крови методом проточной лазерной цитофлуориметрии 50
2.23.1. Исследование количества апоптотически измененных лимфоцитов крови в аннексиновом тесте с использованием пропидия йодида 50
2.2.3.2. Регистрация изменения величины мембранного потенциала митохондрий лимфоцитов крови 51
2.2.4. Оценка уровня активных форм кислорода в лимфоцитах крови 53
2.2.5. Определение продукции фактора некроза опухоли альфа лимфоцитами крови 54
2.2.6. Оценка количества лимфоцитов крови, несущих на своей поверхности рецептор к фактору некроза опухоли альфа I типа 55
2.2.7. Приготовление клеточных лизатов для проведения вестерн-блоттинга 56
2.2.8. Определение содержания белков-регуляторов апоптоза в лимфоцитах крови методом вестерн-блоттинга 56
2.2.9. Статистический анализ результатов исследования 58
Глава 3. Результаты собственных исследований 59
3.1. Особенности реализации программированной гибели лимфоцитов крови при действии рекомбинантной формы фактора некроза опухоли альфа 59
3.1.1. Изменения количества апоптотических и некротизированных лимфоцитов крови в условиях культивирования с рекомбинантной формой фактора некроза опухоли альфа 59
3.1.2. Молекулярные механизмы участия фактора некроза опухолиальфа в реализации апоптотической гибели лимфоцитов крови 61
3.1.2.1. Изменения количества клеток со сниженным трансмембранным потенциалом митохондрий и особенности продукции активных форм кислорода лимфоцитами в условиях культивирования с рекомбинантным фактором некроза опухоли альфа 61
3.1.2.2. Уровень транскрипционных факторов NF-kB, Р53 и ингибитора циклинзависимых киназ P21WAFI/Cipl в лимфоцитах крови, в условиях культивирования с рекомбинантным фактором некроза опухоли альфа 63
3.1.2.3. Уровень белков-регуляторов апоптоза семейства Вс1-2 в лимфоцитах крови в условиях культивирования с рекомбинантным фактором некроза опухоли альфа 65
3.2. Особенности реализации апоптотической гибели лимфоцитов крови в условиях различной продукции эндогенного фактора некроза опухоли альфа на клинической модели клещевого энцефалита 67
3.2.1. Состояние элементов системы TNFa - TNF-RI у пациентов с клещевым энцефалитом 68
3.2.2. Исследование числа апоптотически измененных лимфоцитов, изменение количества клеток со сниженным трансмембранным потенциалом митохондрий и уровня активных форм кислорода в лимфоцитах крови у пациентов с клещевым энцефалитом 69
3.2.3. Уровень белков-регуляторов апоптоза в лимфоцитах кровиу пациентов с клещевым энцефалитом 72
3.2.3.1. Уровень транскрипционных факторов NF-kB и Р53 в лимфоцитах при клещевом энцефалите 72
3.2.3.2. Уровень белков-регуляторов апоптоза семейства Вс1-2 в лимфоцитах крови при клещевом энцефалите 73
Глава 4. Обсуждение результатов исследования 77
Выводы 104
Список литературы 105
