Введение
1. Трансляционные гтфазы 6
Общие свойства ГТФаз 6
Структурные элементы рибосомы, участвующие в регуляции активности трансляционных ГТФаз 9
ГТФазы трансляционного аппарата прокариот 12
Инициация 12
Элонгация и транслокация 14
Терминация 21
2. Результаты и их обсуждение 24
Исследование механизма действия элонгационного фактора EF-G в транслокации 24
Исследование транслокации методом токсин-зависимого разрезания мРНК в рибосомном А-участке 24
Сравнительный анализ пре-, посттранслокациомного и промежуточного состояний рибосомы 28
Исследование обратимости образования в переходного состоянияпри связывании EF-GGDPNP с претранслокационным комплексом 32
Исследование аффинности деацилиро ванных тРНК к Е-у частку рибосомы 35
Анализ чистоты используемых в лабораторной практикенуклеотидов: роль примесей результатах измерений 37
Рибосома -GEF для EF-G? 38
Обсуждение результатов 1 41
Исследование механизма действия трансляционных факторов EF-G и RRF в рибосомного рециклинга 48
Исследование роли дисоциации тРНК с посттерминационногокомплекса в механизме реинициации 49
Роль контактов между 16S рРНК и последовательностью Шайн-Дальгарнопри реинициации трансляции 53
Теримнацинные факторы не транслоцируют связанную в Р-участке посттерм инацио иного комплекса мРНК 56
РольЯЯР и EF-G в диссоциации деацилированой тРНК с рибосомы 59
RRF стимулирует связывание EF-G GDPNP с 50S и понижает с 70S 62
Диссоциация 70S на субъединицы под действием RRF и EF-G 64
Обсуждение полученных результатов II 66
3. Материалы и методы 73
Использовамные препараты и компоненты системы для белкового синтеза in vitro 73
Использованные методы 74
Препаративное выделение рибосом с использованием зонального ротора Ті 15 75
Очистка нуклеотидов: GDP, GDP и GDPNP 80
Экспрессия и очистка EF-G 80
Экспрессия и очистка нативпого EF-Tu 81
Экспрессия и очистка IF2 82
Экспрессия и очистка тРНК1Ым 84
Метод токсин-зависимого разрезания мРНК в рибосомном А-участке 85
Исследование диссоциации [вР]тРНКМеІ с претранслокациошюго комплекса 86
Исследование диссоциации [ Н] fMet-[ С]Пе из рибосомного комплекса под действием пуромицина 87
Исследование связывания GTP, GDP и GDPNP с EF-G 87
Исследование связывания тРНК с рибосомным Е-участком 87
Ультрацентрифугирование рибосомных комплексов в сахарозных градиентах 88
Выводы 89
