Введение
2. Литературный обзор 5
2.1. Биогенетические особенности пластид 5
2.1.1. Пластиды растений 5
2.1.2. Пластом, перенос хлоропластных генов в ядерный геном 6
2.1.3. Хлоропластные белки 8
2.1.4. Основные аспекты биогенеза пластид 10
2.1.4.1. Деление пластид 10
2.1.4.2 Биогенез хлоропластов связан с программой развития листьев 11
2.1.4.3. Дифференциальное развитие пластид внутри листа 12
2.1.4.4. Дифференцировка специализированных типов пластид 14
2.1.4.5. Старение - завершающая стадия развития хлоропластов 15
2.1.5. Регуляция биогенеза пластид 15
2.1.5.1. Фотороцепторы и развитие хлоропластов 15
2.1.5.2. Гормональная регуляция биогенеза пластид 18
2.2. Транскрипция хлоропластных генов 29
2.2.1. Аппарат транскрипции пластома 29
2.2.2. Регуляция транскрипции в пластидах 31
2.3. Заключение 34
3. Материалы и методы 35
3.1. Объект исследований 35
3.2. Обработка листьев фитогормонами 35
3.3. Используемые в работе плазмидные векторы 41
3.4. Выращивание бактерий в LB среде и сине-белая селекция 43
3.5. Выделение плазмидной ДНК 44
3.6. Трансформация клеток Е. coli 47
3.7. Полимеразная цепная реакция 47
3.8. Электрофорез ДНК в агарозном геле 49
3.9. Выделение хлоропластов и пропластид 51
ЗЛО. Метод run-on транскрипции 53
3.10.1. Нанесение фрагментов ДІЖ на нейлоновую мембрану 53
3.10.2. Синтез меченых транскриптов в хлоропластном лизате 54
3.10.3. ДНК-РНК гибридизация 55
3.10.4. Экспозиция мембран и анализ результатов 56
3.11. Измерение концентрации хлорофилла в листьях ячменя 57
4. Результаты и обсуждение 58
4.1. Совместное действие БАП и света необходимо для регуляции транскрипции хлоропластных генов ячменя 58
4.1.1. Синергизм в действии БАП и света на транскрипцию хлоропластных генов 58
4.1.2. Интенсивность света влияет на транскрипцию хлоропластных генов и ее регуляцию цитокинином 62
4.2. Действие АБК на содержание хлорофилла и транскрипцию хлоропластных генов в листьях ячменя 71
4.2.1. Влияние АБК на содержание хлорофилла и транскрипцию хлоропластных генов на свету 71
4.2.2. Влияние АБК на транскрипцию хлоропластных генов в системе с предынкубацией срезанных листьев на воде 77
4.2.3. Влияние света на подавление АБК транскрипции хлоропластных генов 79
4.2.4. Участие разных РНК-полимераз в ингибировании транскрипции хлоропластных генов АБК 83
4.3. Антагонистическое действие БАП и АБК на транскрипцию хлоропластных генов 85
4.4. Влияние метилжасмоната на содержание хлорофилла и транскрипцию хлоропластных генов 87
4.4.1. Влияние метилжасмоната на содержание хлорофилла в листьях ячменя87
4.4.2. Влияние метилжасмоната на транскрипцию хлоропластных генов 89
158
4.5. Антагонистическое действие БАП и метилжасмоната на транскрипцию хлоропластных генов 94
4.6. Влияние ИУК на транскрипцию хлоропластных генов и содержание хлорофилла в листьях ячменя 96
4.7. Влияние ГКз на транскрипцию хлоропластных генов и содержание хлорофилла в листьях ячменя 101
4.8. Влияние эпибрассинолида на содержание хлорофилла и транскрипцию хлоропластных генов 106
4.9. Особенности регуляции транскрипции индивидуальных хлоропластных генов фитогормонами 108
7. Заключение 122
6. Выводы 127
6. Список сокращений
