Введение
ГЛАВА 1. ЭКОЛОГИЯ СВЕТЯЩИХСЯ БАКТЕРИЙ (обзор литературы) 12
1.1. Распространение светящихся бактерий и их роль в симбиозе с высшими организмами 12
1.2. Основы бактериального свечения 16
1.3. Происхождение и биологический смысл бактериальных люминесцентных систем 18
1.4. Значение кислорода в метаболизме светящихся бактерий 22
1.5. Токсические эффекты молекулярного кислорода и его активных форм 23
1.6. Механизмы защиты бактерий от окислительного стресса 26
1.7. Использование бактериальных люминесцентных систем в интегральном анализе 33
ЗАКЛЮЧЕНИЕ ПО ГЛАВЕ 1 35
ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 36
2.1. Объекты исследований 36
2.2. Культивирование бактерий. Определение скорости роста и регистрация свечения 38
2.3. Регистрация генерации бактериями активных форм кислорода 39
2.4. Определение активности антиоксидантных ферментов каталазы и супероксиддисмутазы 39
2.5. Определение активности биолюминесцентных ферментов люциферазы и НАДН: ФМН оксидоредуктазы 41
2.6. Индукция у бактерий окислительного стресса. Ингибирование каталазы 42
2.7. Определение содержания малонового диальдегида, показателя интенсивности окислительного стресса 42
2.8. Определение окислительного стресса биолюминесцентным методом в биологических образцах 43
2.9. Регистрация свечения и спектров люминесценции в присутствии малонового диальдегида 45
2.10. Статистическая обработка результатов 45
2.11. Реактивы, материалы и приборы 45
ГЛАВА 3. ИССЛЕДОВАНИЕ ДИНАМИКИ АНТИОКСИДАНТНОЙ И ЛЮМИНЕСЦЕНТНОЙ СИСТЕМ СВЕТЯЩИХСЯ БАКТЕРИЙ В УСЛОВИЯХ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО СТРЕССА 47
3.1. Генерация активных форм кислорода фотобактериями в процессе роста 48
3.2. Активность ферментов антиоксидантной и люминесцентной систем в зависимости от фаз роста бактерий 50
3.3. Влияние окислительного стресса на активность ферментов антиоксидантной и люминесцентной систем бактерий Vibrio harveyi 56
3.4. Активность ферментов антиоксидантной и люминесцентной систем темнового штамма Vibrio harveyi 64
3.5. Влияние окислительного стресса на активность ферментов антиоксидантной и люминесцентной систем бактерий Vibrio harveyi в условиях ингибирования каталазы 66
ЗАКЛЮЧЕНИЕ ПО ГЛАВЕ 3 72
ГЛАВА 4. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ РЕАКЦИИ ЛЮМИНЕСЦЕНЦИИ ДЛЯ ДЕТЕКЦИИ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО СТРЕССА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБРАЗЦАХ 74
4.1. Мониторинг окислительного стресса в экстрактах тканей и сыворотке крови крыс с использованием лиофилизированных фотобактерий 75
4.2. Контроль интенсивности патологических окислительных процессов в клетках перфузируемой печени гипертермированных крыс с использованием биферментной биолюминесцентной системы in vitro 80
4.3. Изучение малонового диальдегида в качестве возможного субстрата бактериальной люминесцентной реакции 84
ЗАКЛЮЧЕНИЕ ПО ГЛАВЕ 4 88
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 89
ВЫВОДЫ 91
ЛИТЕРАТУРА 92
