Введение
Глава 1. Современные представления о роли оксида азота в регуляции апоптоза (обзор литературы) 12
1.1. Образование оксида азота и внутриклеточные эффекты оксида азота 13
1.1.1. Физико-химические свойства молекулы оксида азота 13
1.1.2. NO-синтазы - ферменты синтеза оксида азота 14
1.1.3. Механизмы накопления молекулы оксида азота в клетке 16
1.1.4. Молекулярные механизмы реализации эффектов оксида азота 17
1.1.5. Механизмы утилизации молекулы оксида азота 22
1.2. Современные представления о молекулярных механизмах апоптоза 23
1.2.1. Роль белков семейства Вс1-2 в регуляции апоптоза... 25
1.3. Молекулярные основы взаимодействия окислительного стресса и апоптоза 27
1.3.1. Влияние оксида азота на молекулярные механизмы реализации апоптоза 30
1.4. Роль апоптоза нейтрофилов в реализации воспаления: молекулярные механизмы в дизрегуляции программированной гибели эффекторных клеток 33
Заключение 45
Глава 2. Материал и методы исследования 47
2.1. Материал исследования 47
2.1.1. Экспериментальный блок исследования 48
2.1.2 Клинический блок исследования 49
2.2. Методы исследования 51
2.2.1. Выделение нейтрофилов крови 53
2.2.2. Культивирование нейтрофильных лейкоцитов крови 53
2.2.3. Метод индукции наработки оксида азота в нейтрофилах крови 54
2.2.4. Метод ингибирования продукции оксида азота в нейтрофилах крови 55
2.2.5. Оценка реализации апоптоза нейтрофилов крови методом проточной лазерной цитометри и 55
2.2.6. Оценка концентрации активных форм кислорода в нейтрофилах крови 57
2.2.7. Определение концентрации ионов кальция в цитоплазме нейтрофилов крови 58
2.2.8. Оценка продукции оксида азота нейтрофилами венозной крови 58
2.2.9. Определение содержания циклических нуклеотидов цАМФ и цГМФ в нейтрофилах венозной крови. 59
2.2.10. Оценка уровня белков-регуляторов (Вс1-2, Вах) в нейтрофилах крови 60
2.3. Статистическая обработка результатов 61
Глава 3. Результаты собственных исследований 63
3.1. Особенности программированной гибели нейтрофилов крови при окислительном стрессе in vitro и остром воспалении 63
3.2. Оценка влияния оксида азота на апоптоз нейтрофилов крови при окислительном стрессе in vitro и остром воспалении 68
3.2.1. Влияние индукции и ингибирования синтеза оксида азота на содержание активных форм кислорода в нейтрофилах при окислительном стрессе in vitro и остром воспалении 68
3.2.2. Изменение числа апоптотических нейтрофилов при; индукции и ингибировании синтеза NO в условиях окислительного стресса in vitro и при остром воспалении , 71
3.2.3. Содержание метаболитов оксида азота в нейтрофилах крови при окислительном стрессе in vitro и остром воспалении в условиях воздействия L-аргинина и ,
L-NAME 72
3.3. Оценка молекулярных механизмов дизрегуляции апоптоза нейтрофилов крови при окислительном стрессе in vitro и остром воспалении 74
3.3.1.Содержание цАМФ и цГМФ в нейтрофилах крови при окислительном стрессе in vitro и остром воспалении в условиях индукции и ингибирования синтеза оксида азота 74
3.3.2.Содержание ионов кальция в нейтрофилах крови при окислительном стрессе in vitro и остром воспалении в условиях индукции и ингибирования синтеза оксида азота 79
3.3.3. Содержание белков-регуляторов апоптоза в нейтрофилах крови при окислительном стрессе in vitro и остром воспалении 81
Глава 4. Обсуждение полученных результатов исследования 84
Выводы 115
Список литературы
