Введение
2. Обзор литературы 6
2.1. Проблема рака и рак поджелудочной железы 6
2.2. Эмбриогенез и канцерогенез 9
2.2.1. Эпителиально-мезенхимальный переход 9
2.2.2. Раковые стволовые клетки 12
2.2.3. Мастер гены и опухолевая прогрессия 13
2.3. Мастер гены поджелудочной железы 16
2.3.1. Строение поджелудочной железы 16
2.3.2. Эмбриогенез поджелудочной железы 17
2.3.3. Сети генных взаимодействий, координирующие эмбриогенез поджелудочной железы 18
2.3.4. Мастер регуляторы развития и канцерогенеза поджелудочной железы 20
3. Материалы и методы материалы 31
3.1. Материалы 31
3.2. Методы 40
4. Результаты и их обсуждение 50
4.1. Относительный уровень экспрессии мастер генов в опухолевых, нормальных и фетальных образцах ПЖ 50
4.2. Выбор модельных систем для исследования роли мастер генов при раке ПЖ 57
4.2.1. Характеристика экспрессии генов-маркёров эпителиального и мезенхимального состояния клеток, а также мастер генов развития поджелудочной железы и их продуктов в модельных клеточных линиях 59
4.3. Индукция эпителиально-мезенхимального перехода в клетках рака поджелудочной железы под действием TGF1 62
4.3.1 Характеристика фенотипа клеток и экспрессии белков-маркёров эпителиального и мезенхимального состояния клеток при индукции клеток линии PANC-1 фактором TGF1 62
4.3.2. Изменение экспрессии генов-маркеров ЭМП и мастер генов развития поджелудочной железы при индукции клеток линии PANC-1 фактором TGF1 64
4.4. Исследование влияния экзогенной экспрессии PDX1 на злокачественный потенциал культур низкодифференцированных клеток PANC-1 и высокодифференцированных клеток BxPC-3 67
4.4.1. Получение клеточных культур PANC-1 и BxPC-3, экзогенно экспрессирующих PDX1 4.4.2 Определение уровня экспрессии гена PDX1 и его продукта в клетках PANC-1PDX1 и BxPC-3PDX1 68
4.4.3 Изменения экспрессии тканеспецифических транскрипционных факторов в клетках PANC-1PDX1 и BxPC-3PDX1 70
4.4.4. Анализ содержания в локусах исследуемых генов гистоновых меток активных энхансеров и известных сайтов связывания PDX1 73
4.4.5. Влияние экзогенной экспрессии PDX1 на пролиферативный потенциал клеток PANC-1 и BxPC-3 74
4.4.6. Влияние экзогенной экспрессии PDX1 на миграционный потенциал 77
5. Заключение 86
6. Выводы 88
7. Список сокращений 89
8. Список литературы 92
