ВВЕДЕНИЕ.................................................................................................................................... 4
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ............................................................................................................ 9
1.1 Роль моноцитов в хроническом и остром воспалении ................................................ 9
1.2 Эндотоксины грамотрицательных бактерий: открытие, структура, функции .......... 10
1.3 Механизм распознавания и ответа на эндотоксин ..................................................... 12
1.4 Транспорт мономеров эндотоксина и их обнаружение клетками врождённого
иммунитета ........................................................................................................................... 13
1.5 Растворимые ЛПС-транспортирующие белки и их роль в активации иммунного
ответа ..................................................................................................................................... 16
1.5.1 Липополисахарид-связывающий белок (LBP) ....................................................... 16
1.5.2 Растворимый рецептор CD14 .................................................................................. 21
1.5.3 Белок миелоидной дифференцировки MD-2........................................................ 25
1.5.4 Белок-аллерген клещей домашней пыли Der p 2 ................................................. 28
1.6 TLR’s как центральные рецепторы в активации иммунного ответа .......................... 32
1.6.1 Характеристика и функции Toll-подобного рецептора 4 (TLR4) .......................... 33
1.6.2 Роль TLR4 в активации врождённого и адаптивного иммунитета ...................... 34
1.6.3 Внутриклеточная передача сигнала от TLR4.......................................................... 35
1.7 Токсины грамположительных бактерий ...................................................................... 37
1.7.1 Активация иммунных клеток посредством ЛТК.................................................... 38
1.8 Влияние хронического воспаления на функциональную активность TLR 2 и TLR 4 и
синтез провоспалительных цитокинов............................................................................... 41
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ........................................................................ 46
2.1. Объекты исследования ................................................................................................. 46
2.2 Разработка дизайна исследования............................................................................... 46
2.4. Анализ распределения субпопуляций моноцитов и количества TLR2 и TLR4 на
поверхности клеток крови методом проточной цитофлюориметрии ............................ 48
2.5. Активация клеток врождённого иммунитета здоровых доноров и пациентов к
синтезу цитокинов бактериальными агентами ................................................................. 50
2.6. Определение концентрации цитокинов в сыворотке крови методом
иммуноферментного анализа ............................................................................................. 51
2.7. Статистическая обработка результатов....................................................................... 52
3
3. Результаты и обсуждение ................................................................................................... 53
3.1 Вклад LBP и sCD14 в активацию клеток крови здоровых доноров
провоспалительными агентами, обладающими различной структурой
липополисахаридов и липотейхоевой кислоты............................................................. 53
3.2 Роль ЛПС-транспортирующих белков (LBP, sCD14, sMD-2) в ответе клеток
врождённого иммунитета пациентов с СД2т и БА+СД2т на липополисахариды
разной структуры или липотейхоевую кислоту.............................................................. 55
3.3 Исследование участия белка крови sMD-2 в активации клеток крови различными
структурами ЛПС и аллергеном Der p 2.............................................................................. 61
3.3.1 Влияние блокирования белка MD-2/sMD-2 на синтез TNF-α и IL-8 в ответ на
аллерген и эндотоксины................................................................................................... 61
3.3.2 Участие Der p 2 и sMD-2 в ответе клеток крови на эндотоксины и аллергены.. 69
3.4 Влияние БА и СД2т на количество рецепторов TLR2 и TLR4 и функциональную
активность клеток крови...................................................................................................... 75
3.4.1 Показатели для отбора исследуемых групп пациентов ....................................... 76
3.4.2 Количество рецепторов TLR2 и TLR4 и функциональная активность клеток крови
условно-здоровых доноров различных возрастных групп ........................................... 77
3.4.3 Особенности синтеза рецептора TLR2 у пациентов с бронхиальной астмой
и/или сахарным диабетом 2 типа.................................................................................... 79
3.4.4 Особенности синтеза рецептора TLR4 у пациентов с БА и/или СД2т.................. 81
3.5 Изменение индуцированного липополисахаридами различной структуры и
липотейхоевой кислотой синтез провоспалительных цитокинов клетками крови при
хроническом слабом воспалении....................................................................................... 82
3.5.1 Изменение соотношения субпопуляций моноцитов при слабом хроническом
воспалении......................................................................................................................... 82
3.5.2 Влияние количества рецепторов TLR2 и TLR4 на синтез цитокинов клетками
врождённого иммунитета в ответ на ЛТК или ЛПС........................................................ 84
ЗАКЛЮЧЕНИЕ ............................................................................................................................ 93
ВЫВОДЫ.................................................................................................................................... 96
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ .............................................................................. 97
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ................................................................................ 98
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ......................................... 121
