Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 13
1.1. Характеристика общелейкоцитарного рецептора – молекулы CD45 13
1.2. Альтернативный сплайсинг и его роль в экспрессии изоформ молекулы 22 CD45
1.1. 1.3. Краткая характеристика теломер и фермента теломеразы 30
1.1.1. 1.3.1. Роль теломеразы в пролиферативном гомеостазе Т-клеток 32
1.4. Гормональная регуляция иммунной системы
Глава 2. Материал и методы исследований 43
2.1. Объект и материал исследования 43
2.2. Методы исследования 43
2.2.1.Выделение мононуклеарных лейкоцитов из периферической крови 45
2.2.2. Выделение наивных (CD45RА+CD62L+) Т-лимфоцитов из фракции мононуклеарных лейкоцитов методом иммуномагнитной сепарации
2.2.3. Культивирование СD45RA+СD62L+ Т-клеточных культур 48
2.2.4. Определение общего числа клеток (в мл) и количества жизнеспособных лимфоцитов в культурах CD45RA+CD62L+ Т-клеток методом проточной цитометрии
2.2.5. Определение поверхностных молекул костимуляции и активации (CD127 и CD28) на CD45RA+CD62L+ Т-клетках методом проточной цитометрии
2.2.6. Определение поверхностных маркеров конверсии наивных Т-клеток методом проточной цитометрии
2.2.7. Выделение тотальной РНК 53
2.2.8. Обратная транскрипция образцов тотальной РНК 55
2.2.9. Определение уровня относительной экспрессии генов методом мультиплексной ПЦР в режиме реального времени
2.2.10. Методы статистического анализа данных
ГЛАВА 3. Результаты собственных исследований 62
3.1. Оценка эффектов стероидных гормонов на общее количество клеток (106/мл) и жизнеспособность в культурах CD2/CD3/CD28-активированных ++ 62
CD45RA CD62L Т-клеток
3.2. Оценка эффектов стероидных гормонов на мембранную экспрессию молекулы активации - CD127 в культурах CD2/CD3/CD28-активированных CD45RA+CD62L+ Т-клеток
3.3. Оценка эффектов стероидных гормонов на мембранную экспрессию молекулы позитивной костимуляции (CD28) в культурах CD2/CD3/CD28 ++ активированных CD45RA CD62L Т-клеток
3.4. Оценка эффектов стероидных гормонов на мембранную экспрессию изоформ общелейкоцитарного рецептора CD45 в культурах CD2/CD3/CD28 ++ 68
активированных CD45RA CD62L Т-клеток
3.5. Оценка влияния стероидных на экспрессию гена каталитической субъединицы теломеразы - hTERT в культурах CD2/CD3/CD28- 70
активированных CD45RA+CD62L+ Т-клеток
3.6. Оценка влияния стероидных гормонов на экспрессию генов Gfi1 и U2af1l4 в культурах активированных CD45RA+CD62L+ Т-клеток
ГЛАВА 4. Обсуждение полученных результатов 76
Выводы 106
Список литературы
