Введение
Глава 1. Обзор литературы 8
1.1. Структура и свойства фосфатидных кислот 8
1.2. Метаболизм фосфатидных кислот в растительной клетке 10
1.2.1 .Синтез фосфатидных кислот в клетке 10
1.2.1.1. Синтез фосфатидных кислот путем ацилирования 10
1.2.1.2. Фосфолипаза D зависимый путь синтеза фосфатидных кислот 17
1.2.1.3. Синтез фосфатидных кислот при участии диацилглицеринкиназы 24
1.2.1.4. Синтез фосфатидных кислот при участии диацилглицеринпирофосфатазы 26
1.2.2. Деградация фосфатидных кислот в растительной клетке 28
1.2.2.1. Деградация фосфатидных кислот при участии фосфатидатфосфатазы 28
1.2.2.2. Фосфорилирование фосфатидных кислот при участии фосф атид аткиназы 29
1.2.2.3. Деацилирование фосфатидных кислот при участии фосфолипаз А 30
1.3. Участие фосфатидных кислот в клеточных процессах 31
1.3.1. Вовлечение фосфатидных кислот в сигнальные процессы 31
1.3.2. Формирование мембранных везикул с участием фосфатидных кислот 35
1.3.3. Участие фосфатидных кислот в синтезе липидных молекул 38
1.4. Механизмы участия фосфатидных кислот в процессах сигнальной трансдукции в растительной клетке 40
1.5. Ионофоры 44
Глава 2. Экспериментальная часть 50
2.1. Растительный материал и его подготовка 50
2.2. Получение препарата микросомальной фракции корней и колеоптилей кукурузы 50
2.3.1. Очистка плазмалеммы в двухфазной системе 51
2.3.2. Выделение эндомембран в градиенте плотности сахарозы 51
2.4. Подготовка препаратов фосфатидных кислот 52
2.5. Регистрация транспорта ионов через везикулярные мембраны 52
2.5.1. Регистрация транспорта ионов Са с использованием зонда индо-1 53
2.5.2. Анализ транспорта ионов Са2+ и Mg2+ с использованием зонда ХТЦ 53
2.6. Анализ протонофорных свойств фосфатидных кислот 54
2.7. Определение количества ионов кальция 54
2.8. Анализ состава и содержания фосфолипидов, экстрагированных из микросомальной фракции корней и колеоптилей кукурузы 54
2.8.1. Экстракция липидов 55
2.8.2. Разделение липидов на колонке с силикагелем 55
2.8.3. Разделение фосфолипидов методом высокоэффективной тонкослойной хроматографии 56
2.8.4. Денситометрическое определение фосфолипидов 56
2.8.5. Анализ жирных кислот 56
2.8.5.1. Получение метиловых эфиров жирных кислот 56
2.8.5.2. Разделение метиловых эфиров жирных кислот методом капиллярной газовой хроматографии 57
2.9. Предобработка колеоптилей и корней БАП и КС1 58
2.10. Определение содержания белка методом Bradford 58
2.11. Статистическая обработка результатов 58
2.12. Реактивы 59
Глава 3. Результаты и их обсуждение 60
3.1. Изучение проницаемости везикул плазмалеммы и эндомембран 60
3.2. Влияние фосфатидной кислоты на кальциевую проницаемость плазмалеммы и эндомембран 64
3.3. Влияние фосфатидной кислоты на транспорт протонов 71
3.4. Анализ жирнокислотного состава фосфатидных кислот, фосфатидилхолинов и фосфатидилэтаноламинов микросомальной фракции корней и колеоптилей проростков кукурузы 73
3.5. Анализ ионофорных свойств фосфатидной кислоты 76
3.6. Влияние БАП на соотношения фосфатидных кислот, фосфатидилхолинов и фосфатидилэтаноламинов в микросомальной фракции корней и колеоптилей кукурузы 88
3.7. Влияние БАП на жирнокислотный состав фосфатидных кислот, фосфатидилхолинов и фосфатидилэтаноламинов в микросомальной фракции корней и колеоптилей кукурузы 92
3.8. Влияние КС1 на соотношение фосфатидных кислот, фосфатидилхолинов и фосфатидилэтаноламинов в микросомальной фракции корней и колеоптилей кукурузы 97
3.9. Влияние КС1 на жирнокислотный состав фосфатидных кислот, фосфатидилхолинов и фосфатидилэтаноламинов в микросомальной фракции корней и колеоптилей кукурузы 101
Заключение 106
Выводы
Список литературы 112
