Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 14
1.1. Микробные экосистемы макроорганизма 14
1.2. Понятие симбиоза 17
1.3. Классификация и распространённость лактобацилл 19
1.4. Взаимосвязь лактобацилл и макроорганизма 21
1.4.1. Положительные эффекты лактобацилл на организм человека 21
1.4.2. Основные механизмы воздействия лактобацилл 22
1.4.3. Адаптационные и пробиотические факторы лактобацилл 22
1.5. Межмикробное взаимодействие лактобацилл (пробиотический фактор) 23
1.5.1. Конкуренция и сотрудничество за питательные вещества 23
1.5.2. Конкурентное исключение 24
1.5.3. Продукция кислот 26
1.5.4. Продукция бактериоцинов 27
1.5.5. Продукция перекиси водорода (Н202) 33
1.5.6. Бактериальная межклеточная взаимосвязь 34
1.6. Воздействие на кишечный эпителий (пробиотический фактор) 35
1.7. Влияние на иммунитет (пробиотический фактор) 38
1.8. Адгезивные свойства лактобацилл 40
1.9. Конкуренция бактерий in vitro 44
1.10. Демонстрация антимикробной активности лактобацилл на моделях животных 46
1.10.1. Адгезивные свойства и персистенция в кишечнике 46
1.10.2. Активность по отношению к Н. Pylory 47
1.10.3. Активность по отношению к микроорганизмам рода Salmonella 47
1.10.4. Активность по отношению к Escherichia coli 47
1.10.5. Активность по отношению к Listeria monocytogenes 48
1.10.6. Активность по отношению кротавирусам 48
1.10.7. Активность по отношению к P. Aeruginosa 48
1.11. Влияние пробиотиков на поддержание здоровья и течение заболевания 49
ГЛАВА 2. Материал и методы исследования 57
2.1. Материал 57
2.1.1. Штаммы микроорганизмов 57
2.1.2. Питательные среды 59
2.2. Методы исследования 60
2.2.1. Выделение чистой культуры микроорганизмов 60
2.2.2. Биохимическая идентификация чистой культуры микроорганизмов...62
2.2.3. Генетическая идентификация чистой культуры микроорганизмов 70
2.2.4. Определение антагонистической способности лактобацилл методом перпендикулярных штрихов 73
2.2.5. Определения кислотопродуцирующей способности лактобацилл 73
2.2.6. Определение факторов патогенности лактобацилл 74
2.2.7. Определение адгезивной способности лактобацилл 77
2.2.8. Определение аутоагрегации лактобацилл 78
2. 2.9. Определение поверхностной гидрофобности лактобацилл 78
2.2.10. Определение способности лактобацилл к 78
2.2.11. Определение способности лактобацилл формировать биоплёнки 79
2.2.12. Отношение лактобацилл к антимикробным препаратам 79
2.2.13. Определение чувствительности лактобацилл к химиопрепаратам ихитозану 80
2.2.14. Определение экзометаболитов лактобацилл 80
2.2.15. Определение антагонистической способности лактобацилл методом двухслойного агара или отсроченного антагонизма (продукция бактериоцинов) 90
2.2.16. Определение антимикробной активности супернатантов, содержащих бактериоциноподобные вещества 90
2.2.17. Совместное культивирование на поверхности плотной питательной среды 91
2.2.18. Определение антивирусной активности лактобацилл 92
2.2.19. Антагонистическая активность лактобацилл в эксперименте на животных in vivo 93
2.2.20. Статистические методы обработки материалов исследований 94
ГЛАВА 3. Результаты собственных исследований Выделение, идентификация и отбор представителей нормобиоценоза, патогенной и условно-патогенной микрофлоры желудочно-кишечного тракта 95
3.1. Культуральные свойства микроорганизмов желудочно-кишечного тракта человека 95
3.2. Морфологические и тинкториальные свойства микроорганизмов желудочно-кишечного тракта человека 99
3.3. Биохимические свойства микроорганизмов желудочно-кишечного тракта человека 101
3.4. Факторы патогенности условно-патогенной и патогенной микрофлоры 104
ГЛАВА 4. Выделение, идентификация и отбор антагонистически активных штаммов лактобацилл 109
4.1. Изучение культурально-морфологических свойств лактобацилл 109
4.2. Факторы патогенности лактобацилл 110
4.3. Отношение лактобацилл к антибактериальным препаратам 110
4.4. Антагонистические свойства лактобацилл 112
4.5. Биохимическая идентификация лактобацилл 113
4.6. Генетическая идентификация лактобацилл 118
ГЛАВА 5. Симбиоз лактобацилл с микробиотой человека 122
5.1. Симбиоз лактобацилл с нормофлорой, условно-патогенной и патогенной микрофлорой желудочно-кишечного тракта 122
5.1.1. Симбиоз лактобацилл, выделенных из полости рта 123
5.1.2. Симбиоз лактобацилл, выделенных из желудка 168
5.1.3. Симбиоз лактобацилл, выделенных из кишечника 182
5.1.4. Симбиоз лактобацилл по отношению к грибам 216
5.2. Симбиоз лактобацилл между собой и бифидобактериями 227
5.3. Симбиоз лактобацилл со штаммами вируса полиомиелита 228
ГЛАВА 6. Адаптационный и пробиотический потенциал антагонистически активных штаммов лактобацилл 231
6.1. Адгезивная способность антагонистически активных штаммов лактобацилл 231
6.2. Аутоагрегация антагонистически активных штаммов лактобацилл 232
6.3. Поверхностная гидрофобность антагонистически активных штаммов лактобацилл 233
6.4. Способность антагонистически активных штаммов лактобацилл ккоагрегации 234
6.5. Способность антагонистически активных штаммов лактобацилл формировать биоплёнки 236
6.6. Кислотопродуцирующая способность лактобацилл 240
6.6.1. Кислотопродуцирующая способность лактобацилл, выделенных из полости рта 240
6.6.2. Кислотопродуцирующая способность лактобацилл, выделенных из желудка 243
6.6.3. Кислотопродуцирующая способность лактобацилл, выделенных из кишечника 245
6.7. Определение экзометаболитов лактобацилл 248
6.7.1. Хромато-масс-спектрометрия на системе «Dionex UltiMate3000- API 2000» 248
6.7.2. Капиллярный электрофорез на системе «Капель-105» 255
6.7.3. Обработка полученных результатов 255
6.7.4. Получение полипептидных фракций, содержащих бактерицины 256
6.8. Определение антагонистической активности полипептидных фракций лактобацилл 257
6.8.1. Определение антагонистической активности полипептидных фракций лактобацилл в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов 257
6.8.2. Определение антагонистической активности полипептидных фракций лактобацилл в отношении представителей нормальной микрофлоры человека 258
6.8.3. Определение антагонистической активности супернатанта бульонной культуры L. acidophilus (helveticus ТШ) NK1 и их полипептидов 259
6.8.4. Определение антагонистической активности супернатанта бульонной культуры Lactobacillus amylovorus БТ-24/88 и их полипептидов 262
6.9. Определение генов, ответственных за синтез бактериоцинов 265
6.10. Антагонистическая активность лактобацилл в эксперименте на животных in vivo 267
ГЛАВА 7. Обсуждение 276
Выводы 301
Практические рекомендации 303
Список работ, опубликованных по теме работы 304
Приложения 345
