Введение
ГЛАВА 1. Литературный обзор 13
1.1. Основные структурные элементы дендримернои макромолекулы 13
1.2. Синтетические концепции 19
1.2.1. Дивергентный метод 20
1.2.2. Конвергентный метод 23
1.2.3. Альтернативные методы синтеза дендримеров 26
1.2.3.1. Полимеризация трехфункциональных мономеров... 29
1.2.4. Твердофазный метод синтеза дендримеров 30
1.3. Структура дендримерных макромолекул и методы ее исследования 35
1.3.1. Гидродинамические методы 39
1.3.2. Спектроскопия ЯМР 45
1.3.3. Масс спектрометрия 47
1.3.4. Меточные подходы 51
1.3.5. Люминесцирующие метки 52
1.3.6. Поляризованная люминесценция 55
1.4. Способы модификации дендримерных структур 58
1.4.1. Поверхностная функционализация 60
1.4.2. Слоевая и сегментальная функционализация 65
1.5. Дендримеры - носители в генной терапии 68
1.5.1. Основные критерии носителей ДНК 68
1.5.2. Невирусные системы генной доставки 69
1.5.2.1. Катионные липиды 71
1.5.2.2. Полимерные системы на основе L-лизина 71
ГЛАВА 2. Полиэтиленимины 73
Дендримеры - эффективные вектора генной доставки 73
Дендримеры на основе L-лизина 75
Методы исследования образования дендример/ДНК комплекса 77
Гель электрофорез 78
Спектроскопия кругового дихроизма 79
Обсуждение результатов 81
Синтез полилизиновых гомо- и гетеродендримеров на полимерном носителе 81
Синтез гомолизиновых дендримеров 87
Синтез гетеродендримеров на основе лизина 88
Выделение, очистка и анализ дендримеров на основе лизина 93
2.2. Исследование молекул полилизиновых дендримеров методом MALDITOF масс
СПеКТрОМетрИИ
2.3. Гидродинамические свойства дендримеров на основе лизина 107
2.4. Исследование гомолизиновых дендримеров различных генераций методом ЯМР спектроскопии 112
2.5. Синтез люминесцентно меченых гомо- и гетеродендримеров на основе лизина. Исследование структурно-динамических свойств и комплексообразующей способности 121
2.5.1. Особенности структурной организации лизиновых дендримеров различных генераций 124
Комплексообразующая способность макромолекул лизиновых дендримеров при взаимодействии с низкомолекулярным органическим анионом 127
Взаимодействие полилизиновых дендримеров с ионизованными молекулами полиметакриловой кислоты в водных растворах и стабильность образующихся комплексов 130
Исследование взаимодействия полилизиновых дендримеров с молекулами ДНК методом спектроскопии кругового дихроизма 138
Исследование дендримеров на основе лизина различных генераций в качестве носителей генныхконструкций 148
Образование комплексов дендримеров с плазмидной ДНК 148
Анализ эффективности трансфекции комплексами ДНК/дендример 150
Изучение эндосомолитических свойств комплексов ДНК/03 и ДНК/05 151
Изучение особенностей внутриклеточной локализации комплексов плазмидной ДНК с
дендримерами после трансфекции in vitro 153
Экспериментальная часть 156
Материалы 156
Оборудование 157
Методы 159
Синтез гомо- и гетеролизиновых дендримеров 159
Твердофазный синтез дендримеров 160
Синтез люминесцентно меченых дендримеров 162
3.3.4. Определение гидродинамических характеристик 164
3.3.5. Спектроскопия кругового дихроизма 164
3.3.6. Получение комплексов дендример-pCMV-nls-lacZ.. 165
3.3.7. Эффективность трансфекции клеток HeLa комплексами дендример-pCMV-nls-lacZ 3.3.8. Исследование структурно-динамических характеристик и комплексообразующей способности люминесцентно меченых дендримеров 167
Выводы 168
Список литературы
