Введение
2. Обзор литературы 6
2.1 Структура мРНК н регуляция трансляции 6
2.1.1 Роль кепа в регуляции трансляции. 6
2.1.2 Роль поли(А)- последовательности в трансляции. 10
2.1.3 Кооперативное действие кепа и поли(А)-последователыюсти на эффективность трансляции . 13
2.1.4 Стабильность мРНКв бесклеточных системах трансляции. 17
2.1.5 Общие черты нетранслируемых областей мРНК эукариот. 18
2.1.6 Окружение стартового кодоиа мРНК. 20
2.2 Бесклеточиая система трансляции из зародышей пшеницы 22
2.2.1 Ионная сила и концентрация М^ в ЭЗП. 23
2.2.2 Влияние полиаминов, уровня АТФ и тРНК на биосинтез белка в ЭЗП. 25
2.2.3 Эндогенные активности ЭЗП. 27
2.3 Термннацня трансляции, котрансляционное сворачивание белков и рибосомиыи дисплей 29
2.3.1 Термннацня трансляции и её регуляция. 30
2.3.2 Котрансляционное сворачивание белков. 32
2.3.3 Рибосомиыи дисплей и гибриды мРНК-белок - основные методы отбора белков in vitro. 36
2.3.4 Достоинства и недостатки систем отбора in vitro. 45
3. Экспериментальная часть 49
4. Результаты и их обсуждение 63
4.1. Выделение бесклеточной системы трансляции из зародышей пшеницы (ЭЗП) и аналитический вариант трансляции в этой системе 63
4.1.1 мРНК и генетические конструкции. 63
4.1.2 Приготовление экстракта из зародышей пшеницы и аналитический вариант трансляции. 68
4.1.3 Качественный анализ целостности мРНКв условиях трансляции в ЭЗП 82 4.2 Синтез и скрининг белковой библиотеки из печени мыши в ЭЗП 87
4.2.1 Исследование агрегации продуктов трансляции с компонентами ЭЗП. 87
4.2.2 Определение чувствительности скрининга в рибосомном дисплее. 97
4.2.3 Синтез нашивной белковой библиотеки из печени мыши и ее скрининг на иммобилизованном метотрексате (ингибиторе активности ДГФР). 98
5. Выводы 102
6. Список литературы 103
