Введение
2 Обзор литературы 11
2.1 Объект исследования жук T. сastaneum 11
2.1.1 Ядро ооцита T. castaneum как модельная система (оогенез) 16
2.2 Ядерные домены ооцитов 20
2.2.1 Внутриядерные тела в ядрах ооцитов насекомых 20
2.2.2 Кластеры интерхроматиновых гранул
2.3 Кариосфера в оогенезе насекомых 25
2.4 Белок Y14 как составная часть комплексов
2.4.1 Комплекс связи экзонов (EJC) 29
2.4.2 Деградация мРНК, содержащих преждевременный стоп-кодон (NMD) 31
2.4.3 Белок Y14 33
3 Материал и методика 36
3.1 Объект 36
3.2 Методы молекулярной биологии
3.2.1 Экстракция мРНК 36
3.2.2 Электрофорез ДНК и РНК 37
3.2.3 Полимеразная цепная реакция (ПЦР) и ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) 37
3.2.4 Клонирование 37
3.2.5 Транскрипция in vitro 38
3.2.6 Методики биоинформатики
3.3 Микроинъекции 39
3.4 Флуоресцентная микроскопия 39
3.5 Иммунофлуоресцентное окрашивание 40
3.6 Иммуноэлектронная микроскопия 42
4 Результаты 43
4.1 Динамика ядерных структур ооцитов Tribolium castaneum. Кариосфера и е капсула 43
4.2 Ядерные тельца ооцитов Tribolium castaneum 46
4.3 Транскрипционная активность хромосом, собранных в кариосферу 51
4.4 Компоненты капсулы кариосферы 53
4.5 Конструкция слитого белка Y14-Myc 57
4.6 Транскрипция плазмиды и сплайсинг гена Y14 в клетках человека линии HEK293 61
4.7 Инъекции мРНК Y14-Мус в ооцит 64
5 Обсуждение 69
5.1 Трудности работы с объектом 69
5.2 Структурные компоненты капсулы кариосферы и активная транскрипция 69
5.3 Динамика ядра ооцита 6 Выводы 79
7 Список литературы 80
