Введение
2.Обзор литературы 16
2.1. Оборудование для культивирования микроорганизмов, культур клеток и вирусов 16
2.2 .Питательные среды и ингредиенты, используемые при культивировании клеток животных и вирусов 19
2.3.Штаммы и их характеристика 23
2.4.Культивирование фиксированных штаммов вируса бешенства 28
2.5.Методы и процессы культивирования микроорганизмов, культур клеток и вирусов 36
2.6.Выделение, очистка и концентрирование вирусного материала 54
2.7.Методы диагностики бактерийных и вирусных препаратов 63
2.7.1 .Традиционные методы 63
2.7.2.ИФА-методы 65
2.7.3.ПЦР-методы 69
2.8.Антигенные свойства вирусов 72
2.9.Инактивация вируса 84
2.10 .Механизмы выработки иммунитета 8 5
2.11 .Технология производства гипериммунных сывороток 92 2.12.Трансгенные животные 94
2.13.Биологические свойства адъювантов и их компонентов 96
2.14.0бсуждение литературного обзора 96
3.Собственные исследования 99
3.1 . Материалы и методы 99
3.1.1 .Культуры клеток и эмбрионы птиц 100
3.1.2.Животные 100
3.1.3.Штаммы 101
3.1.4.0борудование 101
3.1.5.Методы 102
3.1.5.1 .Культивирование микроорганизмов в биореакторах 104
ЗЛ.5.2.Культивирование клеток и вирусов в биореакторах 105
3.1.5.3.Репродукция вируса бешенства 105
3.1.5.4.Репродукция вируса инфекционного ринотрахеита 105
3.1.5.5.Концентрирование вируса 106
3.1.5.6.0чистка вируса бешенства и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота от клеточных белков 106
3.1.5.7.0пределение титра инфекционности вируса бешенства и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота 106
3.1.5.8.Белок 106
3.1.5.9.Комплементсвязывающая активность вируса бешенства и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота 106
3.1.5.10.Преципитирующая активность вируса бешенства и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота 107
3.1.5.11 .Гемагглютинирующая активность вируса бешенства и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота 107
3.1.5.12.0чистка Ig G 107
3.1.5.13 .Оценка чистоты препарата иммуноглобулина G 107
3.1.5.14.0днородность и специфичность препаратов иммуноглобулинов 108
3.1.5.15.0ценка реактогенности масел на мышах 108
3.1.5.16.Оценка токсичности масел на мышах 109
3.1.5.17.Получение гипериммунной сыворотки против "
гемофилеза, стрептококкоза и пастереллеза свиней 109
3.2. Результаты исследований 110
3.2.1. Культивирование культур клеток и вирусов в биореакторах в суспензии и на микроносителях 110
3.2.2. Основные факторы, влияющие на гибель клеток при глубинном культивировании в биореакторах 113
3.2.3. Влияние механического перемешивания и аэрации на гибель клеток в биореакторе 116
3.2.4. Способ оценки токсичности масляных адъювантов и их компонентов, используемых при разработке и производстве биопрепаратов с помощью культуры клеток свиной почки в пробирке с монослоем 124
3.2.4.1. Клеточная культура 124 3.2.4.1.1. Подготовительные операции 124
3.2.4.2. Культивирование первичных клеток СП 124
3.2.4.2.1. Приготовление питательных сред 124
3.2.4.2.1.1. Основной раствор 125
3.2.4.2.1.2. Разведенные растворы 126
3.2.4.2.2. Приготовление масляных адъювантов 128
3.2.4.3. Приготовление первичных клеток СП 128
3.2.5. Суспензионное культивирование клеток сперматогоний свиньи 134
3.2.5.1. Теоретическое обоснование 134
3.2.5.2. Периоды сперматогенеза 135
3.2.5.3. Регуляция сперматогенеза 135
3.2.5.4. Суспензионное культивирование 136
3.2.5.4.1. Первый период суспензионного культивирования клеток семенника поросенка
3.2.5.4.2. Второй период суспензионного культивирования сперматогоний 139
3.2.5.4.3. Третий период суспензионного культивирования сперматоцитов 142
3.2.5.4.4. Четвертый период суспензионного культивирования сперматидов 144
3.2.5.4.5. Основные выводы 147
3.2.5.4.6. Оптимизация культивирования клеток ткани семенника поросенка по основным физико-химическим и биофизическим параметрам 147
3.2.6. Накопление вируса (бешенства, ИРТ, ПГ-3) при
глубинном культивировании в биореакторах 148
3.2.7. Культивирование пастерелл, гемофил и стрептококков в биореакторах 149
3.2.7.1. Анализ традиционного процесса культивирования пастерелл 150
3.2.7.2. Разработка управляемого процесса периодического культивирования пастерелл 153
3.2.7.2.1. Оптимизация процесса культивирования пастерелл на начальной стадии роста (на фазе приспособления и начале фазы логарифмического роста) 154
3.2.7.2.2. Влияние окислительно-восстановительного потенциала культуральной жидкости на рост Pasteurella multocida 155
3.2.7.3. Испытание управляемого процесса культивирования пастерелл
в лабораторных и промышленных условиях 156
3.2.7.3.1. Испытание управляемого процесса культивирования
в лабораторных биореакторах 156
3.2.7.3.2. Испытание управляемого процесса культивирования
в промышленных биореакторах 156
3.2.8. Современные оборудование и методы очистки, концентрирования
и инактивации биоматериала антигенов, вирусов и микроорганизмов 164
3.2.8.1. Очистка и концентрирование вируса ИРТ КРС 164
3.2.8.2. Биологические свойства вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота 182
3.2.8.3. Биологические свойства культурального вируса бешенства 186
3.2.8.4. Очистка и концентрирование вируса бешенства 187
3.2.8.5. Инактивация вируса бешенства 188
3.2.8.6. Получение конъюгата анти-IgG КРС с пероксидазой из хрена 191
3.2.8.6.1. Выделение иммуноглобулина класса G из сыворотки крови крупного рогатого скота 191
3.2.8.6.2. Очистка иммуноглобулина вируса бешенства 195
3.2.9. Разработка метода определения токсичности масляных адъювантов
и их компонентов 196
3.2.9.1. Изучение токсичности масляного адъюванта и его компонентов
на культуре клеток СП в пробирках с монослоем 196
3.2.9.2. Сравнительное изучение показателей токсичности масляных адъювантов и их компонентов, используемых в производстве биопрепаратов, на белых мышах и культуре клеток СП в пробирках с монослоем 199
3.2.10. Получение специфических гипериммунных сывороток для изготовления диагностикумов 202
3.2.10.1. Получение лечебной ассоциированной гипериммунной сыворотки против пастереллеза, гемофилеза и стрептококкоза свиней с использованием различных видов животных 203
3.2.10.2. Способ получения гипериммунной сыворотки против гемофилеза, стрептококкоза и пастереллеза свиней 203
3.2.11. Изготовление диагностических наборов в промышленных условиях 214
4. ОБСУЖДЕНИЕ 219
5. ВЫВОДЫ 231
6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 233
7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 235
8. ПРИЛОЖЕНИЕ 293
