Введение
1 Обзор литературы 13
1.1 Ассоциативные азотфиксирующие ризобактерии рода Azospirillum 13
1.2 Взаимодействие рода Azospirillum с корнями растений и роль отдельных метаболитов в этом процессе 15
1.3 Липополисахариды грамотрицательиых баїсгерий и их роль во взаимодействии с растениями 19
1.3.1 История исследования липополисахаридов грамотрицательиых бактерий 19
1.3.2 Липополисахариды грамотрицательиых бактерий, их топология в клетке и функции 20
1.3.2.1 Роль липополисахаридов в реализации растительно-микробных взаимодействий 24
1.3.3 Особенности первичной структуры липополисахаридов и связанные с пей функции 26
1.3.3.1 Структура и функции липида А 29
1.3.3.2 Структура и функции олигосахарида кора 34
1.3.3.3 Структура и функции О-специфических полисахарид пых цепей 36
1.4 О-аптигеиные свойства и серологическая классификация липополисахаридов различных видов бактерий 38
1.4.1 Серологические исследования бактерий рода Azospirillum 40
1.5 Характеристика методов исследования липополисахаридов 42
1.5.1 Выделение и очистка липополисахаридов 42
1.5.2 Разделение липидного и углеводного компонентов липо-полисахарида 44
1.5.3 Изучение строения О-специфических полисахаридов 46
1.5.3.1 Деструктивные химические методы с применением газожидкостной хроматографии и масс-спектрометрии 46
1.5.3.2 Структурный анализ полисахаридов методом ядерного магнитного резонанса 49
1.6 Липополисахариды и О-специфические полисахариды бактерий ро- № Azospirillum 53
Материалы и методы 57
2.1 Микробные культуры и условия их выращивания и хранения 57
2.2 Приборы и материалы 59
2.3 Методы исследования липополисахаридов бактерий рода Azospirillum 61
2.3.1 Экстракция липополисахаридов азоспирилл 61
2.3.2 Хроматографические методы 61
2,3.2.1 Гель-фильтрация 61
2.3.2.2 Ионообменная хроматография 63
2.3.2,3 Газо-жидкостная хроматография 64
2.3.2,3.1 Определение состава жирных кислот липо полисахаридов 64
2.3.2.3.2 Определение моносахаридного состава поли сахаридов 64
2.3.2.3.3 Определение абсолютных конфигураций моносахаридов 65
2.3.3 Колориметрическое определение состава углеводсодержащих полимеров 65
2.3.4 Получение антител 65
2.3.5 Реакция агглютинации 66
2.3.6 Встречная двойная иммунодиффузия 66
2.3.7 Электрофорез в полиакриламидном геле 66
2.3.8 Иммуиоферментный анализ (ELISA) 67
2.3.9 Выделение О-полисахаридов кислотным гидролизом липополисахаридов 67
2.3.10 Распад по Смиту 67
2..11 Анализ полисахарида методом метилирования по Хакомори 68
2.3.12 Масс-спектрометрия частично метилированных ацетатов полилов 68
2.3.13 ЯМР - спектроскопия 69
2.3.14 Методы работы с ДНК 69
Результаты исследований и их обсуждение 70
3.1 Выделение, хроматографическая очистка и исследование химического состава липополисахаридов 70
3.2 Выделение и исследование липидов А 75
3.3 Получение и характеристика антител на ЛПС бактерий A. brasilense Cd, A. brasilense Sp7 и A. irakense КВС1 80
3.4 Выявление общих антигенных детерминант у ЛПС различных штаммов и видов азоспирилл с использованием полученных антител 84
3.5 Сравнительное исследование О-специфических полисахаридов бактерий A. brasilense S17, Cd, SR75, A. irakense КВС1 и A. Upoferum Sp59b 96
3.5.1 Выделение О-специфических полисахаридов, определение их моносахар ид ного состава и абсолютных конфигураций нейтральных моносахаров методом ГЖХ 96
3.5.2 Определение характера замещения моносахаридных остатков методом метилирования с последующей ГЖХ-масс-спектрометрией 100
3.5.3 Выявление структур повторяющихся звеньев О-специфических полисахаридов бактерий A. brasilense S17, Cd, SR75, A. irakense КВС1 и A. Upoferum Sp59b методом Н и 13С-ЯМР-спектроскопии 103
3.5.3.1 Исследование структуры повторяющегося звена О-специфического полисахарида A. irakense КВС1 103
3.5.3.2 Исследование структуры повторяющегося звена О-специфических полисахаридов бактерий A. Upoferum 8р59ЬиЛ. brasilense Cd 108
3.53.3 Исследование структуры повторяющегося звена О- специфического полисахарида Л. brasilense SR75 112
3.5.3.4 Исследование структуры повторяющегося звена О- специфического полисахарида A. brasilense S17 117
3.6 Деление липополисахаридов бактерий A. brasilense Sp245, SR75, Cd, Sp7, S17, A. lipoferum RG20a, Sp59b и A. irakense KBCl на хемотипы 125
Заключение 128
Выводы 136
Список использованной литературы 137
