Введение
Глава 1 Нейтрофильные гранулоциты – клетки врожденного иммунитета (обзор литературы) 14
1.1 Нейтрофильные гранулоциты и гетерогенность их популяции 14
1.2 Современные методы оценки функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов 20
1.2.1 Внеклеточные ловушки как новый механизм внеклеточной бактерицидности нейтрофильных гранулоцитов 20
1.2.2 Проточная цитофлюориметрия как современный метод иммунодиагностики 29
Глава 2 Материалы и методы исследования 35
2.1 Характеристика обследуемых лиц 35
2.2 Материал для исследования 35
2.3 Получение лейкоцитарной взвеси 35
2.4 Выделение нейтрофилов из периферической венозной крови 36
2.5 Метод забора материала из вагинального и цервикального секрета репродуктивного тракта женщин 36
2.6 Метод забора слюны 37
2.7 Активация нейтрофильных гранулоцитов иммуностимуляторами 37
2.8 Методы обнаружения нейтрофильных внеклеточных ловушек 37
2.8.1 Метод обнаружения нейтрофильных внеклеточных ловушек в фиксированных препаратах цельной крови 38
2.8.2 Метод обнаружения внеклеточных ловушек, образованных нейтрофильными гранулоцитами, выделенными из периферической крови 38
2.8.3 Метод обнаружения нейтрофильных внеклеточных ловушек в мукозальных секретах 39
2.9 Исследование функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов 40
2.9.1 Метод определения фагоцитарной активности нейтрофильных гранулоцитов мукозальных секретов с помощью световой микроскопии 40
2.9.2 Определение фагоцитарной активности нейтрофильных гранулоцитов периферической крови методом проточной цитофлюориметрии 40
2.9.3 Метод оценки внутриклеточного кислородзависимого метаболизма нейтрофильных гранулоцитов мукозальных секретов с помощью НСТ-теста 42
2.9.4 Определение внутриклеточного кислородзависимого метаболизма нейтрофильных гранулоцитов периферической крови методом проточной цитофлюориметрии 44
2.9.5 Метод определения лизосомальной активности нейтрофильных гранулоцитов мукозальных секретов 46
2.10 Определение рецепторов CD11b и CD95 на нейтрофильных гранулоцитах методом проточной цитофлюориметрии 47
2.11 Методы статистической обработки материала 48
Глава 3 Особенности функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов слюны, вагинального и цервикального секретов 50
3.1 Оценка соотношения морфологических форм интактных нейтрофильных гранулоцитов и количества нейтрофильных внеклеточных ловушек в слюне, вагинальном и цервикальном секретах 50
3.2 Оценка лизосомальной активности интактных нейтрофильных гранулоцитов в различных мукозальных секретах 55
3.3 Оценка фагоцитарной функции интактных нейтрофильных гранулоцитов в различных мукозальных секретах 56
3.4 Оценка внутриклеточного кислородзависимого метаболизма интактных нейтрофильных гранулоцитов в различных мукозальных секретах 58
Глава 4 Функциональный ответ нейтрофильных гранулоцитов слюны, вагинального и цервикального секретов на стимуляцию пирогеналом и форбол-12-миристат-13-ацетатом 62
4.1 Влияние пирогенала и ФМА на соотношение морфологических форм нейтрофильных гранулоцитов и количества нейтрофильных внеклеточных ловушек в слюне, вагинальном и цервикальном секретах 63
4.2 Оценка лизосомальной активности нейтрофилов мукозальных секретов после активации пирогеналом и ФМА 69
4.3 Оценка фагоцитарной функции нейтрофильных гранулоцитов различных мукозальных секретов в ответ на стимуляцию пирогеналом и ФМА 71
4.4 Оценка показателей НСТ-теста нейтрофилов слюны, вагинального и цервикального секретов в ответ на стимуляцию пирогеналом и ФМА 73
Глава 5 Особенности функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов цельной крови, лейкоцитарной взвеси и чистой фракции до и после активации у здоровых женщин и мужчин 77
5.1 Оценка количества внеклеточных ловушек, присутствующих в цельной крови, лейкоцитарной взвеси и чистой фракции нейтрофилов, до и после активации пирогеналом и ФМА 77
5.2 Оценка функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов методом проточной цитофлюориметрии 82
5.3 Изменение экспрессии рецепторов CD11b и CD95 на нейтрофильных гранулоцитов периферичемкой крови до и после активации ФМА 84
Заключение 95
Выводы 112
Список наиболее часто используемых сокращений 114
Список литературы 115
