Введение
2 Литературный обзор 17
2.1 Канцерогенез 17
2.1.1 Стадии развития канцерогенеза 17
2.1.2 Экзогенные канцерогенные факторы 18
2.2 Фукоиданы 25
2.2.1 Общие сведения 25
2.2.2 Характеристики структуры фукоиданов 25
2.2.2.1 Структурные группы фукоиданов 31
2.2.3 Фармакинетика, биодоступность и токсичность фукоиданов 41
2.2.4 Противоопухолевое действие фукоиданов
2.2.4.1 Антипролиферативное действие фукоиданов 44
2.2.4.2 Проапоптотическое действие фукоиданов
2.2.4.2.1 Определение понятия «апоптоз». Отличительные признаки апоптоза 51
2.2.4.2.2 Сигнальные пути при апоптозе 52
2.2.4.2.3 Митоген-активируемые протеинкиназные каскады 54
2.2.4.2.4 Индукция апоптоза фукоиданами
2.2.4.3 Антиметастатическое действие фукоиданов 60
2.2.4.4 Антиангиогенное действие фукоиданов 62
2.3 Катехины — полифенолы зеленого чая 65
2.3.1 Состав и структура катехинов. Эпигаллокатехин галлат 65
2.3.2 Фармакокинетика и биодоступность эпигаллокатехин галлата 67
2.3.3 Биологическая активность эпигаллокатехин галлата
2.3.3.1 Антиоксидантная активность эпигаллокатехин галлата 69
2.3.3.2 Регуляция клеточного цикла и индукция апоптоза эпигаллокатехин 71 галлатом
2.3.3.4 Блокада неоангиогенеза эпигаллокатехин галлатом 75
2.3.3.5 Рінгибирование металлопротеиназ эпигаллокатехин галлатом 77
2.3.3.6 Эпигаллокатехин галлат и циклооксигеназа-2 78
2.3.3.7 Фотозащитный эффект эпигаллокатехин галлата
2.4 Заключение 79
3 Обсуждение результатов 80
3.1 Морские организмы как источники биологически активных полисахаридов, полисахаридгидролаз с уникальной специфичностью и их ингибиторов 80
3.1.1 Фукоиданы бурых водорослей 80
3.1.1.1 Выделение и установление структурных характеристик фукоиданов mSaccharina cichorioides 89
3.1.1.2 Выделение и установление структурных характеристик фукоиданов из Saccharina japonica 90
3.1.1.3 Выделение и установление структурных характеристик фукоиданов из Undaria pinnatifida 91
3.1.1.4 Выделение и установление структурных характеристик фукоиданов из Costaria costata, Eisenia bicyclis и Ecklonia cava 92
3.1.1.5 Выделение и установление структурных характеристик фукоиданов из Fucus evanescens 93
3.1.1.6 Выделение и установление структурных характеристик фукоиданов из Sargassum sp., Dictyopteris polypodioides и Padina pavonica 95
3.1.1.7 Выделение и установление структурных характеристик фукоиданов из Sargassum horneri 96
3.1.1.8 Выделение и установление структурных характеристик фукоиданов из Sargassum mcclurei 96
3.1.1.9 Содержание и анализ структуры фукоиданов в зависимости от порядка и места произрастания водорослей 99
3.1.2 Ламинараны бурых водорослей 101
3.1.2.1 Актуальность изучения ламинаранов, полисахаридгидролаз и их ингибиторов 101
3.1.2.2 Выделение ламинаранов из бурой водоросли Eisenia 103 bicyclis
3.1.2.3 Структура высокомолекулярного ламинарана из Eisenia 105 bicyclis
3.1.2.3.1 Исследование структуры ламинарана классическими химическими методами 105
3.1.2.3.2 Ферментативная трансформация ламинарана из Eisenia bicyclis 106
3.1.2.4 Противоопухолевая активность ламинарана из Eisenia bicyclis и 110
продуктов его ферментативного гидролиза
3.1.3 Биологическая активность фукоиданов из бурых
водорослей 111
3.1.3.1 Цитотоксическая активность фукоиданов 111
3.1.3.2 Действие фукоиданов на пролиферацию опухолевых клеток 113
3.1.3.3 Влияние фукоиданов на неопластическую трансформацию клеток, вызванную действием эпидермального фактора роста 115
3.1.3.4 Молекулярный механизм канцерпревентивного действия фукоидана
из бурой водоросли Saccharina cichorioides 117
3.1.3.5 Действие фукоиданов на самопроизвольное формирование колоний опухолевых клеток 120
3.1.3.6 Действие полисахаридов из бурых водорослей Fucus evanescens, Costaria costata и Alariafistulosa на активацию матриксных металлопротеиназ, индуцируемую УФ излучением 123
3.1.3.7 Действие фукоиданов бурых водорослей на элементы врожденного иммунитета 128
3.1.3.7.1 Действие фукоиданов бурых водорослей на созревание
дендритных клеток 128
3.1.3.7.2 Действие фукоиданов на толл рецепторы 133
3.2 Наземные растения как источник биологически активных полифенолов 139
3.2.1 Биологическая активность катехинов зеленого чая 139
3.2.1.1 Действие эпигаллокатехин галлата на пролиферацию клеток: взаимодействие с виментином и регулирование его функций 139
3.2.1.2 Действие эпигаллокатехин галлата на апоптоз опухолевых клеток: взаимодействие с белком, регулируемым глюкозой, и влияние на его функции 144
3.2.1.3 Действие эпигаллокатехин галлата на трансформацию клеток: взаимодействие с онкогеновыми тирозинкиназами и регулирование их функций
3.2.1.3.1 Действие эпигаллокатехин галлата на трансформацию клеток, индуцируемую эпидермальным фактором роста 157
3.2.1.3.2 Действие эпигаллокатехин галлата на трансформацию клеток, индуцируемую инсулиноподобным фактором роста 1 162
3.2.2 Биологическая активность резвератрола 167
3.3 Синергическое действие резвератрола и фукоидана из бурой водоросли Saccharina cichorioides 172
3.4 Заключение 176
4 Экспериментальная часть 179
4.1 Приборы и материалы 179
4.1.1 Приборы 179
4.1.2 Материалы 180
4.2 Методы 184
4.2.1 Аналитические методы 184
4.2.2 Общие методы
4.2.2.1 Экстракция водорослей органическими растворителями 185
4.2.2.2 Экстракция водорослей сверхкритическим диоксидом углерода 185
4.2.2.3 Экстракция полисахаридов из бурых водорослей 185
4.2.2.4 Хроматография 186
4.2.2.5 ИК-спектроскопия 186
4.2.2.6 ЯМР спектроскопия 186
4.2.2.7 Хромато-масс-спектрометрия 186
4.2.2.8 МАЛДИ масс-спектрометрия 187
4.2.2.9 Кислотный гидролиз фукоиданов
4.2.2.10 Определение моносахаридного состава 187
4.2.2.11 Десульфатирование фукоиданов 188
4.2.2.12 Автогидролиз фукоиданов 188
4.2.2.13 Ферментативный гидролиз 188
4.2.2.14 Получение фукоидана в нерастворимой форме 188
4.2.2.15 Связывание фукоидана с эпидермальным фактором роста in vitro 189
4.2.2.16 Деградация по Смиту 189
4.2.2.17 Метилирование 189
4.2.2.18 Получение ацетатов полиолов 190
4.2.2.19 Получение продуктов исчерпывающего ферментативного гидролиза ламинарана 190
4.2.2.20 Частичный гидролиз альгинатов 190
4.2.2.21 Культивирование клеток 190
4.2.2.22 Трансфекция и культивирование стабильных клеточных линий 190
4.2.2.23 Определение цитотоксическои активности природных соединений... 191
4.2.2.24 Измерение клеточной пролиферации 191
4.2.2.25 Неопластическая трансформация клеток (метод мягкого агара) 191
4.2.2.26 Приготовление лизата клеток 192
4.2.2.27 Электрофорез в полиакриламидном геле 192
4.2.2.28 Перенос белков на мембрану (Вестерн-блот) 192
4.2.2.29 Аффинная хроматография 193
4.2.2.30 Подготовка проб и двумерный электрофорез 194
4.2.2.31 Анализ гелей 194
4.2.2.32 Идентификация белков с помощью МАЛДИ ТОФ масс-спектрометрии 194
4.2.2.33 Метод проточной цитометрии 195
4.2.2.34 Люциферазный метод. Определение активности c-Fos, c-Jun и АР-1... 195
4.2.2.35 Определение активности ММР-1 196
4.2.2.36 Определение активности киназ 196
4.2.2.37 Определение активности GRP78 197
4.2.2.38 Конверсия GRP78 197
4.2.2.39 Иммунопреципитация 197
4.2.2.40 Экспрессия и выделение рекомбинантных белков 197
4.2.2.41 GST-BHMeHTHH/GRP78/Fyn/ IGFR аффинное связывание и определение константы диссоциации 198
4.2.2.42 Статистическая обработка данных
5 Выводы 200
6 Список литературы
