Введение
1. Свойства НАД-зависимых гидрогеназ 7
1.1.Общая характеристика ферментов класса гидрогеназ(КФ I.I2) 7
1.2. Представления о механизме каталитического действия гидрогеназ 13
1.3.Исследования по стабильности и кинетике действия гидрогеназ 15
1.4.Общая характеристика НАД-зависимых гидрогеназ (КФ 1.12.1.2) 18
1.5.Схемы выделения высокоочищенных НАД-зависимых гидрогеназ,стабильность ферментов представления D механизме активации 21
1.6.Кинетические свойства НАД-зависимых гидрогеназ 26
1.7. Пути возможного практического использования НАД-зависимых гидрогеназ 29
2. Особенности поведения диссоциирующих ферментных систем 33
2.1.Зависимость удельной ферментативной активности от концентрации фермента для равновесия типа 2М^Д 35
2.2.Кинетика диссоциации/ассоциации ферментов вы зываемая изменением условий 41
2.3. Дивсоциирующие ферментные системы типа мономера димер =^тетрамер(для случая актрівного тетрамера) 47
3.Материалы и методы 50
3.1.Материалы 50
3.2.Методы 51
4. Очистка гидрогеназы водородокисляющих бактерий А .иЖьсиіиіь -І до гомогенного состояния мето дом гидрофобной хроматографии 60
4.1.Методика очистки 60
4.2.Спектральные характеристики гомогенной гидрогеназы 68
4.3.Определение молекулярного веса НАД-зависимой гидрогеназы из А.^<ЛуЛ«і -1 71
4.4. Субъединичиый состав НАД-зависимой гидро геназы 77
5. Определение равновесной и кинетических констант процесса диссоциации гидрогеназы 78
6.Инактивация гидрогеназы под действием моче вины 89
7. Кинетические свойства НАД-зависимой гидрогеназы, проявляемые при катализе НАДН-дегидрогеназной реакции 99
7.1.Кинетические параметры НАДН-дегидрогеназной реакции 99
7.2.Кинетический метод альтернативных субст ратов 104
7.3.Ингибирование НАДН-дегидрогеназной активности субстратами,продуктами и аналогом продукта 110
8. Формальная кинетика реакции восстановления НАД водородом 116
Выводы 126
