Введение
1. Обзор литературы 18
1.1. Доменная организация клеточного ядра 18
1.1.1. Общие представления о системе ядерных компартментов 18
1.1.2. Краткая характеристика основных ядерных компартментов 23
1.1.2.1. Хроматиновый компартмент 23
1.1.2.2. Ядрышко 28
1.1.2.3. Экстрахромосомные ядерные домены 34
1.1.2.3.1. Общая характеристика доменов интерхроматинового пространства ядра 34
1.1.2.3.2. Кластеры интерхроматиновых гранул 40
1.1.2.3.3. Тельца Кахаля 44
1.1.3. Актин в системе структурно-функциональной организации клеточного ядра 47
1.2. Ранние эмбрионы млекопитающих как модель для изучения ядерной компартментализации 53
1.2.1. Активация эмбрионального генома 53
1.2.2. Эпигенетические механизмы в раннем эмбриогенезе млекопитающих 65
1.2.2.1. Пострансляционные модификации гистонов 65
1.2.2.2. Метилирование ДНК 67
2. Материал и методика 73
2.1. Получение эмбрионов 73
2.2. Иммунофлуоресцентная микроскопия 75
2.2.1. Непрямое иммунофлуоресцентное мечение давленых препаратов 75
2.2.2. Непрямое иммунофлуоресцентное мечение тотальных препаратов 76
2.2.3. Использованные первичные антитела 77
2.2.4. FRET-анализ 80
2.2.5. Прямое иммунофлуоресцентное выявление актина 80
2.3. Электронная микроскопия 81
2.3.1. Стандартная трансмиссионная электронная микроскопия 81
2.3.2. Иммуноэлектронная микроскопия 82
2.4. Электрофоретическое разделение белков и иммуноблотинг 82
2.5. Ингибиторный анализ 83
2.6. Ферментный анализ 84
2.7. Микроинъекции 85
2.7.1. Br-УТФ 85
2.7.2. (U)22-метилолигонуклеотид 85
2.8. Фотометрический анализ 86
2.9. Статистическая обработка данных 86
3. Результаты и обсуждение 87
3.1. Структурная организация ядер эмбрионов мыши в период АЭГ 87
3.1.1. Общая морфологическая характеристика ядер доимплантационных эмбрионов 87
3.1.2. Морфогенез КИГ в раннем эмбриогенезе мыши 92
3.1.3. Динамика молекулярного состава КИГ в период АЭГ 97
3.1.4. Коилинсодержащие и симплекинсодержащие структуры в ядрах ранних эмбрионов мыши 104
3.1.5. Гетерохроматин, ассоциированный с проядрышками 110
3.1.6. Структурные перестройки ядер эмбрионов после искусственного подавления транскрипционной активности 115
3.1.7. Обсуждение к разделу 121
3.1.7.1. Морфодинамика КИГ в раннем эмбриогенезе мыши 121
3.1.7.2. Гетерогенность коилинсодержащих структур в ядрах ранних эмбрионов мыши 129
3.1.7.3. Проядрышки и ассоциированный с ними гетерохроматин в раннем эмбриогенезе мыши 133
3.2. Структурно-функциональная организация ядер эмбрионов мыши в состоянии «двухклеточного блока in vitro» 143
3.2.1. Общая морфологическая характеристика эмбрионов в состоянии «двухклеточного блока in vitro» 143
3.2.2. Транскрипционная активность ядер эмбрионов в состоянии двухклеточного блока in vitro 148
3.2.3. Локализация факторов транскрипции и сплайсинга мРНК в ядрах блокированных эмбрионов 150
3.2.4. Обсуждение к разделу 153
3.3. Актин в ядрах ранних эмбрионов мыши 158
3.3.1. Особенности локализации различных форм актина в ядрах эмбрионов 158
3.3.2. Морфофункциональный анализ особенностей локализации внутриядерного актина при использовании разных антител 163
3.3.3. Топологическое взаимодействие внутриядерного актина и факторов экспорта мРНК 171
3.3.4. Обсуждение к разделу 179
Заключение 187
Выводы 194
Список основных публикаций по теме работы 196
Список литературы 200
Благодарности 256
