Введение
Обзор литературы 7
1. Рассеянный склероз 7
1.1 Роль Т-клеток в развитии и патологии рассеянного склероза 9
1.2 Роль В-клеток в развитии и патологии рассеянного склероза 14
1.3 Структурные особенности CDR и проблема кроссреактивности антител. 18
1.4 Этиология рассеянного склероза 22
1.5 Вирусное влияние на развитие Рассеянного Склероза (Инфекционные факторы окружающей среды) 24
1.5.1 Вирус Эпштейн-Барр 27
1.5.2 Человеческий вирус герпеса 6 31
1.5.3 Вирус ветряной оспы 32
1.5.4 Вирус Торке Тено 32
1.5.5 Цитомегаловирус 33
1.5.6 Вирус простого герпеса 34
1.5.7 Человеческий эндогенный ретровирус (HERV) 34
2. Комбинаторные библиотеки 36
2.1 Комбинаторные фаговые библиотеки антител человека 36
2.2 Конструирование иммунных библиотек 41
Экспериментальная часть 44
1. Проверка функциональности фаг-дисплейной библиотеки репертуара одноцепочечных антител больных рассеянным склерозом 44
2. Скрининг библиотеки на ОБМ и получение моноклональных одноцепочечных антител, связывающих ОБМ . 46
3. Анализ полученных одноцепочечных антител, связывающих ОБМ 49
3.1 Анализ одноцепочечных анти-ОБМ антител, экспонированных на бактериофаге. 49
3.2 Анализ одноцепочечных антител в индивидуальном виде. 50
3.3 Определение гомологии зародышевых линий 54
4. Получение полноразмерных человеческих антител на основе одноцепочечных антител, связывающих ОБМ 58
4.1 Доказательство in vitro кроссреактивности между аутоантигеном ОБМ и белком вируса Эпштейна-Барр LMP1 58
5. Рациональный анализ комбинаций тяжелых и легких цепей анти-ОБМ антител, полученных комбинаторным подходом. 60
5.1 Изучение изменения уровня кроссреактивности в зависимости от комбинации цепей с использованием технологии Luminex 61
5.2 Изучения изменения аффиности к антигену (ОБМ) путем измерения констант диссоциации с использованием метода поверхностного плазмонного резонанса 64
6. Биоинформатический анализ аутореактивных IgG 67
7. Широкомасштабное секвенирование. 73
Материалы и методы 86
Работа с нуклеиновыми кислотами 86
Амплификация фрагментов ДНК методом полимеразной цепной реакции 86
Рестрикция 86
Лигирование 86
