Введение
1. Белки обонятельного эпителия наземных позвоночных (обзор литературы) 7
1.1. Введение 8
1.2. Строение органа обоняния наземных позвоночных 11
1.2.1. Структура и функции слизи обонятельного эпителия 15
1.3. Белки, участвующие в перирецепторных процессах 17
1.3.1. Одорант-связывающие белки 17 1.3.1.1. Запах-связывающие свойства ОСБ in vitro и их физиологическая роль in vivo 20
1.3.2. Ферменты биотрансформации 23
1.4. Белки, принимающие участие в рецепции обонятельного сигнала 27
1.4.1. Белки, специфичные для ресничек обонятельных рецепторных клеток 29
1.4.2. Мембранные белки обонятельного эпителия, способные эффективно связывать молекулы одорантов 32
1.4.3. Семейство генов, кодирующих белки, принадлежащие к классу рецепторов, сопряженных с G-белками 34
1.4.4. Рекомбинантные белки, продукты экспрессии генов, кодирующих обонятельные рецепторы позвоночных 39
1.5. Заключение 41
2. Результаты и обсуждение 43
2.1. Введение 44
2.2. Определение полной аминокислотной последовательности 45-кДа белка 46
2.3. Анализ аминокислотной последовательности 45-кДа белка 58
2.4. Определение полной аминокислотной последовательности 28-кДа белка 63
2.5. Анализ аминокислотной последовательности 28-кДа белка 67
3. Экспериментальная часть (материалы и методы) 71
3.1. Материалы 72
3.1.1. Реактивы 72
3.1.2. Ферменты 73
3.1.3. Штаммы Е. coli и плазмидные векторы 73
3.1.4. Микробиологические среды и буферные растворы 73
3.1.4.1. Микробиологические среды 73
3.1.4.2. Буферные растворы для денатурации и иммобилизации ДНК на нитроцеллюлозных фильтрах 74
3.1.4.3. Растворы для гибридизации нуклеиновых кислот 74
3.1.4.4. Растворы для in situ гибридизации на тканевых срезах 74
3.1.4.5. Растворы для выделения плазмидной ДНК 75
3.1.4.6. Буферные растворы для ферментов модификации ДНК и РНК 75
3.1.4.7. Буферные растворы для приготовления компетентных клеток Е. coli 76
3.1.4.8. Фотографические растворы 76
3.1.4.9. Другие растворы 77 3.2. Методы 77 "
3.2.1. Протеолиз 45-кДа белка 77
3.2.2. Обратно фазовая ВЭЖХ 77
3.2.3. Определение N-концевой аминокислотной последовательности 78
3.2.4. Масс-спектрометрический анализ 78
3.2.5. Приготовление агарозного геля 78
3.2.6. Выделение ДНК фага А. 78
3.2.7. Выделение плазмидной ДНК из клеток Е.соИ 80
3.2.8. Рестрикция и картирование фрагментов ДНК 81
3.2.9. Перенос ДНК на мембрану по методу Саузерна 82
3.2.10. Перенос и иммобилизация ДНК фага Я. на фильтрах 82
3.2.11. Перенос и иммобилизация ДНК из Е.coli на нитроцеллюлозных фильтрах 83
3.2.12. Ник-трансляция ДНК 83
3.2.13. Радиоактивное мечение олигодезоксирибонуклеотидных зондов 84
3.2.14. Блот-гибридизация по Саузерну. Гибридизация in situ бактериальных колоний и фаговых бляшек 84
3.2.15. Извлечение ДНК из агарозных гелей 85
3.2.16. Получение компетентных клеток Exoli 86
3.2.17. Трансформация компетентных клеток Е.соИ 86
3.2.18. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) 87
3.2.19. Клонирование продуктов ПЦР 87
3.2.20. Определение нуклеотидных последовательностей по методу Сенгера 88
3.2.21. In situ гибридизация на тканевых срезах 89
4. Выводы 92
5. Спрісок сокращений 93
6. Список литературы
