Введение
Глава 1. Обзор литературы 12
1.1. Активные формы кислорода и их роль в биосистемах . 12
1.2. Антиоксидантная система 17
1.2.1. Супероксиддисмутаза 18
1.2.2. Катал аза 20
1.2.3. Пероксидазы 21
1.2.4. Низкомолекулярные антиоксиданты ...23
1.3. Активные формы кислорода и злокачественный рост 25
1.4. Окислительный стресс и апоптоз 34
1.5. Белки семейства Вс1-2 39
1.6. Класс антрациклинов. Механизм прооксидантного действия в проявлении противоопухолевой активности 44
1.6.1. Образование свободных радикалов 44
1.6.2. Комплексы антрациклинов с металлами 53
1.6.3. Образование свободных радикалов антрациклинов и их противоопухолевая активность 56
1.7. Ферменты, участвующие в активации доксорубицина 63
1.7.1. НАДН-дегидрогеназа 63
1.7.2. НАД(Ф)Н-хиноноксидоредуктаза 1 64
1.7.3. Ксантиноксидаза 68
Глава 2. Материалы и методы исследования 71
2.1. Культура клеток. Условия культивирования 71
2.2. Схема разрушения клеток 71
2.3. Оценка цитотоксичности 71
2.4. Оценка уровня образования перекиси водорода (Н2О2) 72
2.5. Оценка уровня образования супероксид-анион-радикала (О21) 72
2.6. Измерение хемилюминесценции 72
2.7. ЭПР-спектроскопия 73
2.8. Определение активности Си,гп-супероксиддисмутазы 73
2.9. Определение активности Мп-супероксиддисмутазы 74
2.10. Определение активности каталазы 74
2.11. Определение активности глутатионпероксидазы 75
2.12. Определение активности глутатион-З-трансферазы 75
2.13. Определение активности глутатионредуктазы 75
2.14. Определение активности НАД(Ф)Н-хиноноксидоредуктазы 1 76
2.15. Определение активности ксантиноксидазы 76
2.16. Определение активности НАДН-дегидрогеназы 76
2.17. Определение концентрации белка 77
2.18. Определение содержания восстановленного глутатиона 77
2.19. Определение содержания малонового диальдегида . 77
2.20. Оценка внутриклеточного уровня экспрессии Вс1-2
с помощью метода Western blot 78
2.21. Оценка уровня экспрессии генов bcl-2 и Ьах с помощью RT-PCR 78
2.22. Методы статистического анализа 80
Глава 3. Результаты исследования 81
3.1. Изменение уровня АФК и активности АФК-продуцирующих ферментов в процессе развития лекарственной резистентности опухолевых клеток к доксорубицину 82
3.2. Исследование свободных радикалов и парамагнитных центров негемового железа в чувствительных и резистентных к доксорубицину клетках К562 95
3.2.1. Оценка уровня свободных радикалов 95
3.2.2. Парамагнитные комплексы негемового железа 97
3.3. Изменение активности антиоксидантних и Г5Н-зависимых ферментов, уровня экспрессии генов bcl-2 и Ьах при формировании лекарственной устойчивости клеток К562 к доксорубицину 103
3.4. Оценка корреляционных связей в процессе развития резистентности к DOX в клетках К562 107
Глава 4. Заключение... 121
Выводы 133
Список литературы 134
