Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы
1.1. Азоспириллы: характеристика рода и его экологических особенностей .. 11
1.2. Азотный метаболизм азоспирилл 18
1.3. Бактериальные глутаминсинтетазы: катализ, структура и физико-химические свойства 26
1.4. Регуляция активности и кинетические характеристики додекамерных глутаминсинтетаз 38
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования
2.1. Объект исследования и условия его культивирования 55
2.2. Разрушение клеток и получение грубого экстракта 56
2.3. Хроматографические методы 57
2.4. Определение концентрации белка 58
2.5. Электрофорез в полиакриламидном геле 58
2.6. Определение активности глутаминсинтетазы 58
2.7. Определение степени аденилирования глутаминсинтетазы 60
2.8. Метод кругового дихроизма 61
2.9. Метод эмиссионной спектроскопии ядерного гамма-резонанса 61
2.10. Получение пермеабилизированных клеток 62
ГЛАВА 3. Результаты исследований и их обсуждение
3.1. Влияние различных источников азота и углерода в среде культивирования на степень аденилирования ГС A. brasilense Sp245 63
3.2. Получение электрофоретически гомогенных препаратов глутаминсинтетазы A.brasilense 65
3.3. Исследование термостабильности глутаминсинтетазы 71
3.4. Специфичность фермента к катионам двухвалентных металлов 73
3.5. Кинетическое поведение глутаминсинтетазы при активации катионами двухвалентных металлов 77
3.6. Влияние агглютинина зародышей пшеницы на активность и степень аденилирования глутаминсинтетазы 88
3.7. Исследование вторичной структуры глутаминсинтетазы 92
3.8. Изучение металлсвязывающих центров глутаминсинтетазы 100
Выводы 108
Список использованной литературы 120
